1、菌種分離

選擇生長正常、健壯、無病蟲害的新鮮蛹蟲草作為分離材料，用野生早期生長（8月底以前出土）的蛹蟲草分離得到的菌種具有明顯的早熟性。菌種分離可采用孢子分離或組織分離，生產(chǎn)上常用組織分離法。將蛹蟲草用清水洗去外表泥土，再用0.1%升汞液消毒1~3分鐘，用無菌水沖洗數(shù)次，然后再用95%乙醇浸泡3~5分鐘，用無菌水洗凈后進(jìn)行分離。用解剖刀切去蟲體外部，避開腸道，切取內(nèi)部白色組織塊或其子座內(nèi)的組織塊接種。將組織塊接種在分離培養(yǎng)基或加有50微克/毫升鏈霉素的加富培養(yǎng)基上，于20℃恒溫箱培養(yǎng)10天左右，挑選性狀良好者作為母種。以菌絲白色，粗壯濃密，呈匍匐狀緊貼培養(yǎng)基生長，邊緣整齊，無明顯絨毛狀白色氣生菌絲，后期分泌黃色色素，菌絲見光后變橘黃色者為優(yōu)良菌種。

將分離菌種進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)后，接種在米飯培養(yǎng)基上進(jìn)行接種。于18~20℃培養(yǎng)20~30℃，若無污染則繼續(xù)培養(yǎng)，1個(gè)月后即可形成橙紅色子實(shí)體，評定種性，選性狀優(yōu)良者用于生產(chǎn)。 

2、母種培養(yǎng)

菌種分離和母種可以采用以下培養(yǎng)基：

3、PDA培養(yǎng)基

CM培養(yǎng)基：土壤浸出液100毫升，磷酸二氫鉀1.5克，磷酸氫鉀4克，鏈霉素50毫克，瓊脂15克，加水至1000毫升。供分離用。

CM培養(yǎng)基：蛋白胨15克，葡萄糖20克，磷酸二氫鉀1克，維生素B?半片，瓊脂18克，松針浸出液500毫升，腐殖土浸出液500毫升。

CM?培養(yǎng)基：纖維素粉20克，蛋白胨18克，葡萄糖20克，瓊脂18克，水1000毫升。雜木屑200克，麥麩100克，葡萄糖20克，硫酸銨1克，瓊脂20克，水1000毫升。

加富培養(yǎng)基：馬鈴薯200克，玉米粉30克，葡萄糖20克，蛋白胨3克，磷酸二氫鉀1.5克，硫酸鎂0.5克，瓊脂17~19克，水1000毫升。

Czapek培養(yǎng)基：硝酸鉀2克，磷酸氫鉀1克，氯化鉀0.5克，硫酸鎂0.5克，硫酸鐵0.01克，蔗糖30克，瓊脂18克，水1000毫升。

合成培養(yǎng)基：葡萄糖10克，蛋白胨10克，含脂蠶蛹粉12克，全脂奶粉10克，磷酸氫鈉1克，磷酸二氫鉀1.5克，瓊脂20克，水1000毫升。
玉米淀粉20克，天門冬素5克，氯化鈉0.5克，硫酸鎂0.5克，酵母膏2克，磷酸二氫鉀1克，碳酸鈣1克，瓊脂20克，水1000毫升。

亦可采用其他蟲草菌培養(yǎng)基。將發(fā)滿菌絲的蛹蟲草在無菌環(huán)境下切成0.5厘米左右的小塊，放置PDA在培養(yǎng)基內(nèi)完成接種，無光條件養(yǎng)菌。按常規(guī)制作，滅菌。接種后，在20~22℃恒溫箱培養(yǎng)，7~10天菌絲長滿，保藏在0~4℃冰箱備用。 

4、原種和栽培種培養(yǎng)

原種培養(yǎng)基一般以麥粒為主料配方，在蛹蟲草上建議直接使用母種接栽培種。

栽培種培養(yǎng)基使用大米培養(yǎng)基，即每瓶分別加入大米40克與營養(yǎng)液50毫升，然后于壓力0.12兆帕、溫度121℃下滅菌20分。原營養(yǎng)液成分如下：葡萄糖5克/升、黃豆8克/升、奶粉5克/升、檸檬酸三銨1.0克/升、磷酸二氫鉀1.0克/升、硫酸鎂1.0克/升、維生素B?10毫克/升。進(jìn)行120℃為期45分的高壓殺菌，取出后待冷卻即可。 

5、栽培季節(jié)

蛹蟲草屬中低溫型菌類。在自然條件下，一年可栽培兩季，春栽在2~3月，這時(shí)氣溫較低，可通過加溫培養(yǎng)菌絲體，4~5月份自然氣溫上升到20℃左右，空氣相對濕度大，正是子座生長的好季節(jié)；秋栽在7~8月份進(jìn)行栽培，9~10月份出草，這樣前期氣溫較高，有利于培養(yǎng)菌絲體，后期氣溫下降到20℃左右，有利于子座的生長發(fā)育。若在室內(nèi)人工控制環(huán)境下四季均可栽培。 

6、栽培工藝

蛹蟲草子實(shí)體的栽培主要有蠶蛹培養(yǎng)基栽培和麥粒培養(yǎng)基栽培兩種方式，以大米或小麥培養(yǎng)基栽培為主。以下幾種常用配方可供參考。
大米100%，磷酸二氫鉀0.15%，維生素B微量，蛋清少許。

大米90%，高粱10%，磷酸二氫鉀0.1%，硫酸鎂0.05%，酵母粉0.5%，蛋白胨0.2%。

大米50.8%，麩皮25%，玉米粉10%，蔗糖2%，雜木屑6%，蠶蛹粉6%，尿素0.1%，硫酸鎂0.1%，維生素B微量。

大米68%，蠶恪粉26%，蔗糖5%，蛋白胨1%，維生素B微量。

大米67%，玉米30%，葡萄糖1%，蠶蛹粉1%，蛋白陳1%，磷酸二氫鉀0.1%，硫酸鎂0.05%，檸檬酸銨0.05%，維生素B微量。

小米95%，葡萄糖3.5%，蛋白胨1.2%，磷酸二氫鉀0.1%，硫酸鎂0.2%，維生素B微量。

高粱45%，玉米渣40%，小米10%，蔗糖2%，蛋白胨2%，酵母粉0.8%，磷酸二氫鉀0.1%，硫酸鎂0.1%。

小麥94%，蔗糖5%，磷酸二氫鉀0.1%，硫酸鎂0.1%，酵母粉0.5%，蛋白胨0.3%。

取上述任意一種培養(yǎng)基，大米、小麥、高粱、碎玉米等在清水中浸泡5~6小時(shí)，瀝去水后放入鍋內(nèi)蒸熟，加入輔助原料，調(diào)節(jié)含水量為60%~65%。用500毫升罐頭瓶裝料，每瓶裝干料約50克，將料面壓平，瓶口用聚丙烯薄膜包扎封口，一般采用高壓滅菌，在0.147兆帕壓力下（128℃）滅菌1.5小時(shí)，也可采用常壓滅菌，于100℃下維持10小時(shí)（分兩次滅菌各5小時(shí)，間隔5小時(shí)）。滅菌后培養(yǎng)基要求上下濕度一致，米粒間有空隙，不呈糊狀。 

培養(yǎng)基冷卻至30℃以下時(shí)，于無菌條件下接種。每瓶接種固體種10克或液體菌種10毫升。

7、菌絲培養(yǎng)

將接種后的瓶子排放在培養(yǎng)室的層架上進(jìn)行培養(yǎng)，室內(nèi)要保持黑暗、通風(fēng)，空氣相對濕度控制在65%左右。菌絲發(fā)育初期，為減少雜菌污染，室內(nèi)溫度宜保持在15~18℃，切忌溫度忽高忽低，否則難以高產(chǎn)。15~20天后菌絲可長滿料層，此時(shí)將溫度調(diào)節(jié)到20~23℃，繼續(xù)培養(yǎng)，超過25℃不易形成子座。 

8、出草管理

當(dāng)菌絲體長滿后即可增加光照，白天利用自然散射光，保持在200勒克斯，夜晚可用日光燈作光源，每天光照時(shí)間不少于10小時(shí)，以促進(jìn)菌絲體轉(zhuǎn)色和刺激原基形成。菌絲見光后由白色逐漸轉(zhuǎn)變成橘黃色或橘紅色。當(dāng)培養(yǎng)基表面或四周有橘黃色色素出現(xiàn)，聚集有黃色水珠，并可見大小不一的圓丘狀橘黃色菌絲隆起時(shí)，為子座即將形成的前兆。此時(shí)室內(nèi)溫度應(yīng)保持在19~23℃，并提高空氣相對濕度至80%~90%。濕度太大易誘發(fā)瓶內(nèi)氣生菌絲，對子實(shí)體生長不利；濕度太小易使培養(yǎng)料過早失水而影響子實(shí)體生長發(fā)育。為保持適宜濕度，可噴霧水于地面，每天3~4次。子實(shí)體生長期間要適當(dāng)通風(fēng)，補(bǔ)充新鮮空氣，為減少瓶內(nèi)水分散發(fā)，在整個(gè)培養(yǎng)期不揭去封口薄膜，可在薄膜上用針穿刺小孔，以利瓶內(nèi)外氣體交換。另外，蛹蟲草有明顯趨光性，光線不均勻會造成子實(shí)體扭曲或一邊倒，因此在子實(shí)體形成之后，應(yīng)根據(jù)情況適當(dāng)調(diào)整培養(yǎng)瓶與光源的相對方向，或調(diào)整室內(nèi)光源方向，使受光均勻，以保證子實(shí)體正常生長，提高產(chǎn)量和質(zhì)量。 

9、采收加工

當(dāng)子實(shí)體長高到7~8厘米，子座的上端有黃色粉末狀物時(shí)，應(yīng)及時(shí)采收。如采收過遲，則子實(shí)體枯萎或倒苗腐爛。采收時(shí)，用無菌手術(shù)鑷將子實(shí)體從培養(yǎng)基上摘下即可。子實(shí)體采收后，將根部整理干凈，及時(shí)曬干或低溫下紅外線烘干，然后用適量黃酒噴霧使其回軟，整理平直后扎成小捆，用防潮包裝保藏。如需保存，干品含水量應(yīng)在13%以下，以防止發(fā)霉變質(zhì)。采收第一潮菇后，停水3~4天，然后在瓶內(nèi)注入營養(yǎng)液，10~20天后可長出第二批子座。

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