2.2.4 線性關(guān)系考察

分別精密吸取混合對照品溶液1、5、10、15、20、25、30μL注入高效液相色譜儀中，按上述色譜條件分析。以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，對照品進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到的回歸方程及相關(guān)系數(shù)分別為：Y=2×109X-23 374,r=0.999 9;Y=6×108X-18 200,r=0.999 5;Y=4×108X-13 246,r=0.999 3；表明原兒茶酸在0.021 95～0.658 5μg，兒茶素在0.047 2～1.416μg，表兒茶素在0.041 5～1.245μg時，峰面積與進(jìn)樣量呈良好的線性關(guān)系。

2.2.5精密度試驗(yàn)

精密吸取混合對照品溶液，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，結(jié)果原兒茶酸、兒茶素、表兒茶素峰面積的RSD分別為0.35%、0.45%、1.83%，表明儀器精密度良好。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取樣品粉末1.0 g，精密稱定，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，室溫放置，分別于0、2、4、6、8、13、24 h進(jìn)樣測定，結(jié)果原兒茶酸、兒茶素、表兒茶素峰面積的RSD分別為1.52%、1.76%、1.15%，說明樣品在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一樣品粉末6份，每份1.0 g，精密稱定，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，進(jìn)樣測定，結(jié)果顯示原兒茶酸、兒茶素、表兒茶素峰面積的RSD分別為0.91%、0.61%、0.65%，表明重復(fù)性良好。

2.2.8 加樣回收率試驗(yàn)

取已知含量的樣品粉末6份，每份1.0 g，精密稱定，分別精密加入原兒茶酸、兒茶素、表兒茶素對照品，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液并測定，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見表2。

2.2.9 樣品含量測定

取雞血藤粉末1.0 g，精密稱定，每批藥材平行3份，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液并進(jìn)樣測定，并計(jì)算含量。結(jié)果見表3和圖2。

2.3 芒柄花素、染料木素含量

測定參照梁永樞等[10]方法進(jìn)行測定。

2.3.1 色譜條件

Waters Xselect C18色譜柱（250 mm×4.6 mm,5μm）；流動相：0.1%H3PO4-乙腈（66∶34），等度洗脫；檢測波長：254 nm；流速：1 m L·min-1；柱溫：25℃；進(jìn)樣量：20μL。對照品及供試品溶液色譜圖見圖3。

2.3.2 對照品溶液的制備

分別精密稱定染料木素和芒柄花素對照品1.90、1.19 mg，加甲醇定容至5 m L，制成對照品貯備液。分別精密吸取染料木素、芒柄花素對照品貯備液1 m L，定容至5 m L作為混合對照品溶液。

2.3.3 供試品溶液的制備

取樣品粉末約1 g，精密稱定，加70%乙醇30 m L加熱回流提取2次，每次15 min，合并2次提取液，減壓回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状级ㄈ萦? m L棕色量瓶中，搖勻，作為供試品溶液。

2.3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

分別吸取“2.3.2”項(xiàng)下各對照品溶液20μL注入液相色譜儀中，測定峰面積積分值。以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，對照品的進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程與相關(guān)系數(shù)分別為：Y=8×109X-192 794,r=0.999 9;Y=6×109X-99 356,r=1；表明染料木素在0.076～2.28μg，芒柄花素在0.047 6～1.42μg時，峰面積與進(jìn)樣量呈良好的線性關(guān)系。

2.3.5 精密度實(shí)驗(yàn)

精密吸取對照品溶液20μL，按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，結(jié)果染料木素、芒柄花素的RSD分別為1.15%、0.95%，表明儀器精密度良好。

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