維生素C又名抗壞血酸，是維持人體正常代謝的重要化合物，具有防治缺鐵性貧血、預(yù)防白內(nèi)障和心血管疾病功能，醫(yī)學(xué)研究表明，補(bǔ)充足夠的維生素C，可以提高人體免疫力，抗壞血病、預(yù)防感冒，防治人體衰老，降低膽固醇等作用，特別是在預(yù)防肝炎和肝硬化有很好效果。維生素C按構(gòu)型分為L型和D型，其中L型能參與體內(nèi)各種抗氧化、清除自由基等多種生理作用，對人體具有生物活性，而D型基本不參與人體生理作用，多為食品中抗氧化劑，在自然界極少存在。但是人體自身不能合成維生素C，必須從食物中獲取。蔬菜水果是人體攝入維生素的主要途徑，維生素C是水果蔬菜主要的品質(zhì)指標(biāo)之一，了解不同蔬菜水果及其貯存方式對蔬菜水果中維生素C的含量變化，為人類日常膳食獲取維生素C提供參考依據(jù)，讓人類有選擇性地?cái)z入富含維生素C的蔬菜與水果，有益于人體健康。

維生素C測定的方法一般有化學(xué)法、比色法、紫外分光光度法、熒光法、液相色譜法等，而這些方法所需試劑較多、操作繁瑣、流動相復(fù)雜。試驗(yàn)采用一種低濃度0.1%的草酸作流動相、ZORBAXSB-Aq柱分離的高效液相色譜法，分析蔬菜和水果及其保存方式對其維生素C含量影響，取得理想效果。

1材料與方法

1.1儀器與試劑

1.1.1儀器與設(shè)備

1260高效液相色譜儀（美國Aglent公司）；電子天平（Quintix224-1CN，賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司）；勻漿機(jī)（ARTMiccra，MICCRA）；超純水機(jī)（GenpurePro，美國Thermo公司）；落地式高速冷凍離心機(jī)（AvantiJ-30I，BeckmanCoulter）。

1.1.2試劑

維生素C標(biāo)準(zhǔn)對照品（純度99.90%）；草酸（分析純）。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1色譜條件

色譜柱ZORBAXSB-Aq(C18，4.6mm×150mm，5μm），流動相為0.1%草酸，流速1mL/min，柱溫30℃，檢測波長254nm，進(jìn)樣量10μL。

1.2.2標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

準(zhǔn)確稱取維生素C標(biāo)準(zhǔn)品0.1g于小燒杯中，用0.1%草酸溶解，轉(zhuǎn)移至100mL棕色容量瓶中，稀釋至刻度，得到1mg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲備液，儲備液在2～8℃避光條件下保存1周。用超純水將質(zhì)量濃度1mg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲備液稀釋成濃度500mg/L中間液。取適量中間液稀釋成質(zhì)量濃度為0.5，1.0，5.0，25.0，50.0，125.0和250mg/L維生素C標(biāo)準(zhǔn)使用液，上機(jī)測定峰面積，計(jì)算線性方程，外標(biāo)法定量。

1.2.3樣品前處理

試驗(yàn)所用蔬菜和水果購自附近農(nóng)貿(mào)市場。

樣品處理：將蔬菜和水果洗凈，取適量樣品，放于組織勻漿機(jī)中勻漿，準(zhǔn)確稱取25.00g樣品于50mL離心管中，用超純水清洗勻漿機(jī)，洗液一并轉(zhuǎn)入離心管中，用0.1%草酸溶液定容，搖勻后，90W功率超聲30min，在低溫（0℃）條件下以3000r/min離心5min，取上清液過0.45μm濾膜。

1.2.4回收率和精密度試驗(yàn)

在基質(zhì)溶液中加入維生素C標(biāo)液，質(zhì)量濃度分別為10和50mg/L，重復(fù)上機(jī)測定8次（每次進(jìn)樣10μL），檢測維生素C色譜峰面積，計(jì)算RSD值。

1.2.5貯存方式與維生素C含量關(guān)系試驗(yàn)設(shè)計(jì)

購買當(dāng)天采摘上市的番茄、辣椒、獼猴桃和草莓后立即測定其維生素C含量，所有番茄和辣椒隨機(jī)分成2組。第1組（散裝）：散放在鏤空的塑料筐里；第2組（保鮮膜包裝）：用保鮮膜包裹。2組均存放在室溫（20℃）自然條件下保存。1周內(nèi)每天分別測定每組番茄和辣椒果實(shí)的維生素C含量；獼猴桃和草莓隨機(jī)分為2組，第1組（室溫），散放在鏤空的塑料筐里，第2組（冷藏），散放在0℃冰箱冷鮮保存。1周內(nèi)每天分別測定獼猴桃和草莓的維生素C含量。

2結(jié)果與討論

2.1標(biāo)準(zhǔn)工作曲線

用0.1%草酸溶液配制質(zhì)量濃度為0.5，1.0，5.0，25.0，50.0，125.0和250mg/L維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液，制作維生素C標(biāo)準(zhǔn)曲線。維生素C在0.5～250mg/L時(shí)，線性回歸方程為Y=28.1357X+11.8468，相關(guān)系數(shù)0.9999，根據(jù)3倍信噪比（S/N≥3）確定該方法檢出限為0.060mg/kg（接近空白樣品）。

2.2回收率和精密度試驗(yàn)

分別在5.0，20和100mg/kg的樣品中加入5.0，20和150mg/kg維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行回收率試驗(yàn)，每份樣品重復(fù)測定8次；結(jié)果見表1，從結(jié)果可知，其回收率在98.00%～105.60%之間，相對偏差為0.22%～2.48%。

2.3蔬菜和水果中維生素C含量測定結(jié)果

空白提取液、陽性樣及維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖如圖1所示。常見蔬菜水果樣品中維生素C含量測定結(jié)果見表2。美國科學(xué)學(xué)會認(rèn)為，每人每天維生素C的最佳用量應(yīng)為200～300mg，且不低于60mg。從表2可以看出，日常水果中，蘋果、梨、香蕉和葡萄很難滿足身體需求；有選擇地食用奇異果、鮮棗等維生素C含量高的水果，可以滿足維生素C需求；而蔬菜中大部分是能夠補(bǔ)充足夠的維生素C。

2.4不同貯存條件下蔬菜和水果中維生素C含量變化
 

從圖2包裝方式和貯存時(shí)間對番茄和辣椒維生素C含量有明顯影響，隨著貯存時(shí)間延長，番茄和辣椒的維生素C含量總體呈下降趨勢，番茄中維生素C含量隨時(shí)間減少速度快于辣椒維生素含量；從圖2可以明顯看出，包裝辣椒和番茄維生素C含量下降趨勢明顯小于散裝番茄和辣椒，這與魏春雁等對番茄中維生素含量研究一致。

從圖3可以看出，貯存溫度和時(shí)間對獼猴桃和草莓維生素C含量有明顯影響，隨著貯存時(shí)間延長，獼猴桃和草莓維生素C含量總體呈下降趨勢，0℃條件冷藏的獼猴桃和草莓維生素C明顯比室溫貯存的穩(wěn)定性好，故0℃冷藏獼猴桃和草莓維生素C含量下降緩慢。

3結(jié)論

在流動相0.1%草酸溶液，上樣量10μL，流速1.0mL/min，檢測波長254nm，柱溫25℃，ZORBAXSB-Aq(C18，4.6mm×150mm，5μm）為色譜柱的色譜條件下，高效液相色譜可測定多種蔬菜和水果中維生素C含量，方法線性范圍寬、相關(guān)性好，峰形窄，靈敏度高，基質(zhì)加標(biāo)回收率高，分析中受樣品中其他雜質(zhì)的影響較小，方法重復(fù)性和再現(xiàn)性好。維生素C及其不穩(wěn)定容易損失，方法高效快速、簡便，克服其他方法過于復(fù)雜、前處理維生素C損失嚴(yán)重缺點(diǎn)，可作為大批量蔬菜和水果檢測維生素C含量的檢測方法，同時(shí)選擇包裝或冷藏保鮮可降低蔬菜和水果中維生素C含量損失率。

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