維生素C又稱L-抗壞血酸，是人體正常生理代謝所必不可少的一種維生素，能調(diào)節(jié)人體氧化還原代謝反應(yīng)，增強(qiáng)人體對(duì)外界環(huán)境的抗應(yīng)激能力以及免疫能力，水果中VC含量豐富，是人體VC重要攝取來(lái)源之一。目前，測(cè)定VC的方法有高效液相色譜法、熒光法、2,6-二氯靛酚滴定法、電化學(xué)分析法，本文采用紫外-可見(jiàn)分光光度法對(duì)VC的穩(wěn)定性、最佳提取條件和10種常見(jiàn)水果的VC含量進(jìn)行了考察與測(cè)定，為人們鑒定水果營(yíng)養(yǎng)價(jià)值及儲(chǔ)存方式提供一定的參考。

1材料與方法

1.1材料

獼猴桃、冰糖橙、橙子、桔子、草莓、油桃、火龍果、菠蘿、梨、蘋(píng)果均購(gòu)自某農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)；抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)品(AR)；冰乙酸(AR)；磷酸(AR)；鹽酸(AR)；草酸(AR)。

1.2儀器

UV759CRT紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)(上海佑科儀器有限公司)；JY電子天平(上海方瑞儀器有限公司)；GZX-9246數(shù)顯鼓風(fēng)干燥箱(上海博迅實(shí)業(yè)有限公司)。

1.3提取工藝流程

水果樣品→去蒂、清洗→研磨成勻漿→稱取試樣→加入提取劑→避光環(huán)境下浸提→4000r/min離心處理→紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)測(cè)定(243nm)其吸光度→計(jì)算質(zhì)量

1.4實(shí)驗(yàn)方法

準(zhǔn)確稱取5.0000g預(yù)處理后的樣品勻漿于燒杯中，按料液比(g∶mL)1∶2的比例加入2%醋酸溶液，在室溫(20℃)避光環(huán)境中浸提30min，將浸提液在4000r/min條件下離心處理10min，取上層清液定容至100mL容量瓶后，用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)在最大吸收波長(zhǎng)243nm處測(cè)定吸光度。每組試樣做七次平行試驗(yàn)，取其平均值，根據(jù)維生素C標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得出樣品中維生素C的含量。

1.5紫外吸收曲線的測(cè)定

為了考察樣品維生素C的含量，采用濃度為0.08mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液和樣品溶液在紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)上進(jìn)行波長(zhǎng)掃描，紫外吸收曲線見(jiàn)圖1和圖2。

由圖1及圖2可以看出維生素C標(biāo)準(zhǔn)品的λmax=243nm，水果樣品的λmax=244nm，它們的最大吸收波長(zhǎng)幾乎一致，這說(shuō)明維生素C在酸性溶液中的最大吸收波長(zhǎng)為243nm。

1.6結(jié)果計(jì)算

將待測(cè)液的吸光度值代入維生素C標(biāo)準(zhǔn)曲線，查出待測(cè)樣品濃度，再根據(jù)公式計(jì)算出樣品中VC的含量。

 2結(jié)果與討論

2.1VC提取正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析

通過(guò)對(duì)料液比、醋酸濃度、提取時(shí)間、提取溫度等單因素對(duì)VC提取效果的分析，進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)。為了確定最佳提取效果，以提取液在λmax=243nm處吸光度為評(píng)判指標(biāo)，對(duì)以上四個(gè)因素設(shè)計(jì)L9(34)正交實(shí)驗(yàn)，因素水平表見(jiàn)表1，正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。

由表2可以看出，以上四個(gè)因素對(duì)VC提取效果的影響的主次順序依次為A>B=C>D，即：料液比>醋酸濃度=提取時(shí)間>提取溫度。從正交分析數(shù)據(jù)可以得出，維生素C的最佳提取條件為A1B1C1D1，即：料液比1∶2(g∶mL)、醋酸濃度2%、提取時(shí)間30min以及提取溫度20℃。

2.2維生素C標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

本實(shí)驗(yàn)采用紫外-可見(jiàn)分光光度法對(duì)VC的含量進(jìn)行了測(cè)定，將1mg/mL的VC標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液梯度稀釋為0.02,0.04,0.08,0.12,0.16,0.20mg/mL的系列溶液分別檢測(cè)其吸光度。以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)繪制維生素C標(biāo)準(zhǔn)曲線(見(jiàn)圖3)。

由圖3可以看出，維生素C在濃度為0.02～0.20mg/mL之間符合朗伯-比爾定律，有良好的線性關(guān)系，所得回歸方程為Y=3.7994X-0.0066；相關(guān)系數(shù)R2=0.9996。

2.3樣品含量測(cè)定

選取新鮮水果桔子、草莓、橙子、紅心火龍果等10種樣品測(cè)定其中VC的含量，根據(jù)不同水果樣品下測(cè)得的吸光度，在維生素C標(biāo)準(zhǔn)曲線中讀出提取濃度，計(jì)算得出不同水果樣品提取質(zhì)量的柱狀關(guān)系圖，如圖4。

由圖4可以得出，水果樣品中維生素C含量順序?yàn)楂J猴桃(407.58mg/100g)>冰糖橙(390.86mg/100g)>橙子(319.31mg/100g)>桔子(284.65mg/100g)>紅心火龍果(253.32mg/100g)>草莓(244.76mg/100g)>油桃(201.01mg/100g)>菠蘿(181.44mg/100g)>梨(170.95mg/100g)>蘋(píng)果(144.95mg/100g)。

2.4方法檢出限

分別測(cè)定試劑空白8組，其吸光度值見(jiàn)表2.3，在置信度約為99%時(shí)，其檢出限MDL=t(n-1.099)×S=0.003mg/mL。

2.5精密度

實(shí)驗(yàn)對(duì)10種水果樣品分別制備7個(gè)平行樣，檢測(cè)其吸光度，計(jì)算含量。測(cè)得相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)在0.09%～0.58%之間，精密度較好。

2.6加標(biāo)回收率

采用樣品加標(biāo)的方法進(jìn)行加標(biāo)回收率測(cè)定，取三份樣品加入不同濃度的標(biāo)液測(cè)定其吸光度，平行測(cè)定6組，加標(biāo)回收率在96.6%～106.8%之間。

3結(jié)論

本文采用紫外分光光度法對(duì)生活中常見(jiàn)的水果中VC的含量進(jìn)行測(cè)定分析，結(jié)果表明低濃度的醋酸在冷藏避光的條件下對(duì)維生素C具有一定的保護(hù)作用。通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)得出：料液比對(duì)VC浸提效果影響較大，溫度對(duì)提取效果影響較小，料液比1∶2(g∶mL)，濃度2%，時(shí)間30min，溫度為20℃時(shí)是最佳提取條件。測(cè)定結(jié)果表明：獼猴桃中VC含量較高，為407.58mg/100g，蘋(píng)果中的VC含量相對(duì)較低，為144.95mg/100g。該方法檢出限為0.003mg/mL,RSD<1%，回收率在96.6%～106.8%之間，本方法檢測(cè)水果中VC的含量可以得到較好的結(jié)果。

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