中藥血清藥物化學是通過對實驗動物口服給藥后的含藥血清進行分析，對藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及復方配伍機制進行快速篩選的一項新型技術(shù)，在中藥質(zhì)量控制、中藥炮制研究等領(lǐng)域都發(fā)揮重要作用。隨著不斷的發(fā)展創(chuàng)新，將其與血清藥理學、藥動學等學科相互融合，為中藥及復方的研究提供了更加完善的手段。對中藥血清藥物化學的主要技術(shù)手段、應用研究及其與一些學科的聯(lián)合使用現(xiàn)狀進行綜述，為中藥血清藥物化學的發(fā)展提供新的研究思路。

中藥血清藥物化學是以實驗動物口服給藥一段時間后，除去內(nèi)源性蛋白等雜質(zhì)的血清為研究對象，應用液相、質(zhì)譜等現(xiàn)代分離鑒定技術(shù)對其中所含成分進行分析，從而推測藥物發(fā)揮藥效的活性成分及其在體內(nèi)的代謝過程。自1997年血清藥物化學這一概念在國內(nèi)提出后，不僅彌補了當時國內(nèi)藥物體內(nèi)代謝研究的空白，為中醫(yī)藥的現(xiàn)代研究提供了新的研究思路和方法，也因其對藥物體內(nèi)外成分差異的直觀呈現(xiàn)而迅速發(fā)展起來。經(jīng)過20年專家學者的共同努力，血清藥物化學不僅取得了豐富的學術(shù)研究成果，其相關(guān)的理論思想及技術(shù)手段也隨之崛起，本文將對近年來血清藥物化學的應用現(xiàn)狀進行綜述并分析，為其日后在中醫(yī)藥領(lǐng)域的發(fā)展提供思路和啟發(fā)。

1 血清藥物化學的技術(shù)手段

1.1 動物血清處理手段

動物血清樣品中含有多種內(nèi)源性蛋白質(zhì)，會嚴重干擾血中移行成分的檢測，故除去蛋白是血液在進行分析之前的重要步驟。但由于血清樣品受內(nèi)源性雜質(zhì)多、樣品量較小等因素的影響，除蛋白后待測成分含量可能在檢測限之下，為了提高檢測靈敏度，也可采用一些方法對樣品進行純化富集。對近年來文獻報道的血清處理手段進行總結(jié)分析，發(fā)現(xiàn)常用的血清處理方法為溶劑法，通過在樣品中加入有機試劑、重金屬鹽或強酸溶液，使蛋白質(zhì)變性或減小蛋白質(zhì)溶解度而除去蛋白；富集純化最常用的方法為萃取法，是利用待測成分與雜質(zhì)在溶劑中的分配系數(shù)或在固定相上的吸附能力差異，將待測成分與雜質(zhì)進行分離。實驗時，要針對不同的藥物屬性，選擇不同的處理方法，使雜質(zhì)對待測成分的干擾降到最小。有時，為了提高待測成分的濃度，也可將不同個體的血清樣品進行混合，同時達到減小個體差異的目的。

1.2 血清分析手段

含藥血清需采用現(xiàn)代技術(shù)手段進行分析，常用的有液相色譜法（HPLC）、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（HPLC-MS）、超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（UPLC-MS）、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（GC-MS）等。

HPLC法為血清藥物化學最基本最常用的方法，通過建立藥物體內(nèi)外指紋圖譜，并與單味藥、陰性藥指紋圖譜進行比較，確定入血成分并進行歸屬，然后通過對照品進行指認，但由于樣品量少且濃度較低，為防止體內(nèi)成分的人為遺漏，迫切需要應用分離度和靈敏度更高的技術(shù)手段，現(xiàn)在多數(shù)研究會選擇使用UPLC。

液-質(zhì)聯(lián)用技術(shù)是將高分離能力的液相色譜與高檢測能力的質(zhì)譜進行有效結(jié)合，這種方法可直接得到樣品的保留時間、質(zhì)核比、碎片離子等信息，可直接通過數(shù)據(jù)庫對比及文獻查閱等方法對不同圖譜中的差異性物質(zhì)進行推測，同時獲得原型成分及代謝產(chǎn)物的成分信息，從而進一步推測藥物在體內(nèi)的代謝途徑，金華等采用UPLC-ESI-MS技術(shù)對金芪降糖片中16種入血的原型成分進行了確認，覃小麗等[12]采用UPLC-Q-TOF-MS技術(shù)明確了黑骨藤提取物的17種血中移行成分，這些都為闡明藥物的作用機制奠定了基礎(chǔ)。液-質(zhì)聯(lián)用技術(shù)彌補了HPLC用對照品進行一一比對的操作繁瑣且沒有目的性的缺陷。此外，一些系統(tǒng)自帶的軟件也可應用于中藥體外化學成分和體內(nèi)原型成分或代謝產(chǎn)物的快速篩選和綜合分析，達到事半功倍之效。

2 血清藥物化學的研究應用

2.1 明確中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機制

中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究是中藥現(xiàn)代化研究的核心途徑，中藥大都為天然藥物，具有多成分、多途徑、多靶點的治療特性，其成分種類復雜且數(shù)目繁多，中藥進入人體后，成分與成分之間的相互作用、成分與機體之間的相互作用均為其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究增加了重重阻礙。血清藥物化學基于入血成分及其代謝產(chǎn)物才是發(fā)揮藥效的活性成分的思想基礎(chǔ)，藥物經(jīng)過胃腸道代謝后成分種類與數(shù)目大大減少，簡化了中藥研究的復雜性，只對入血成分進行分析，從而明確藥物的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機制。例如刺五加體外樣品中可以分離得到131個成分，而灌胃后的血清樣品中僅得到了12個原型成分及9個代謝成分；小柴胡湯加減提取物中共鑒定出63個化合物，而在血清中僅得到6種原型成分和2種代謝產(chǎn)物，都在大大減小工作量的同時對藥效物質(zhì)基礎(chǔ)進行了最快速有效的篩選?；ㄇ嗨?7-葡萄糖苷、番瀉苷A、蘆薈大黃素和大黃酸可能為七味消炎湯抗菌、抗炎的生物活性成分，甲基偽麻黃堿、苯甲酰安息香堿、苯甲?；鶠躅^堿和美沙康堿可能為麻黃附子細辛湯的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，這些均通過血清藥物化學得以證明。

2.2 闡明中藥炮制理論

中藥在使用前常根據(jù)其用藥目的或調(diào)劑、制劑的不同要求而進行炮制，使藥物的理化性質(zhì)發(fā)生變化，從而達到不同的藥用目的，但是其發(fā)生化學變化、產(chǎn)生不同藥效作用的機制尚不能完全清楚，且藥效變化與成分變化之間的關(guān)聯(lián)性也缺乏依據(jù)。Wang等建立了一種基于液-質(zhì)聯(lián)用技術(shù)的方法，用于篩選和分析正常和急性血瘀大鼠口服生大黃或酒大黃后血清中吸收的生物活性成分和代謝產(chǎn)物，初步鑒定了16種化合物，主要包括II期代謝物。首次從血清藥物化學水平探討了中藥炮制所致藥理作用變化的可能解釋。而后又有學者陸續(xù)對百部蜜炙、山茱萸酒炙進行了血清藥物化學研究，為其藥理作用及作用機制提供了依據(jù)。血清藥物化學為中藥炮制機制的研究提供了可靠的研究思路及技術(shù)手段。

2.3 闡明中藥復方配伍機制

中藥復方為中醫(yī)藥治療的重要手段，以整體觀為核心，遵循君臣佐使的原則，將不同的藥物配合使用達到治療的目的，雖然其臨床療效在長期的實踐中已取得大眾的認可，但關(guān)于中藥復方藥味之間復雜的相互作用并不能僅僅依靠傳統(tǒng)中醫(yī)理論來說服大家。陳丹陽等對腎康方全方及方中各味藥物的含藥血清圖譜進行了分析，明確了復方中的入血成分并不是各藥味入血成分的簡單相加。中藥血清藥物化學可以對入血成分進行全面的分析，基于血中移行成分之間彼此消長的規(guī)律，對復方在體內(nèi)的吸收、分布、代謝、排泄過程進行推測，揭示藥物在體內(nèi)的代謝過程和復方的作用機制，更加深刻的詮釋復方配伍的科學性、合理性。李驊對雙丹方的組方機制進行了研究，以丹參中的主要成分丹參素配伍丹皮中的主要成分丹皮酚對原方進行模擬，表明二者配伍具有顯著的心肌損傷的保護作用，且丹參素能使丹皮酚吸收入血加快，作用時間延長，在心、腦等靶組織中的濃度也顯著提升，揭示了雙丹方的配伍機制。此外，六味地黃丸、酸棗仁湯、茵陳蒿湯等方劑的配伍機制也通過不同配伍方式的血清藥物化進行了研究。

2.4 建立中藥質(zhì)量標準

中藥有效成分復雜，單一成分的定性、定量分析方法并不能全面的反映其臨床功效，且中藥質(zhì)控指標與其臨床功效之間也缺乏明確的關(guān)聯(lián)性，這些都阻礙了我國中藥質(zhì)量控制體系為國際社會所認可。Zhang等為了更有效合理的控制三子固本顆粒的質(zhì)量，對其進行了血清藥化研究，發(fā)現(xiàn)15批樣品口服給藥后血液中均檢測出沒食子酸和車前草素，表明了這兩種成分作為三子固本顆粒劑質(zhì)量控制的生物標志物的合理性。Chen等通過對黃芪顆粒的含藥血清進行分析，認為花青素-7-O-β-D-葡萄糖苷、降鈣素、花青素、黃芪皂苷Ⅳ和香豆素可能具有藥理活性，確定為黃芪顆粒質(zhì)量控制的生物標志物，并建立了一種簡便、快速、高效的HPLC-DAD-ELSD法同時測定這5種成分。在血清藥物化學對中藥的有效成分進行確認的基礎(chǔ)上建立中藥質(zhì)量控制標準，可以提高中藥質(zhì)量標準的科學性和有效性，使我國中藥質(zhì)量控制體系走向國際化。

2.5 促進新藥的開發(fā)

以經(jīng)典方劑為基礎(chǔ)，根據(jù)不同的癥狀進行加減藥味，或以現(xiàn)有方劑為基礎(chǔ)，進行處方優(yōu)化，或在現(xiàn)有研究的基礎(chǔ)上對動植物藥和礦物藥的有效部位或有效成分進行提取純化研發(fā)新藥，均是新藥開發(fā)的重要手段。中藥血清藥化可以對藥物的有效成分進行最直觀的體現(xiàn)，可以為新藥的開發(fā)提供一條最為便捷的途徑。以王喜軍為核心的團隊在血清藥物化學的基礎(chǔ)上利用大孔樹脂對越橘的入血成分進行定向制備，獲得的有效部位群可測成分達70%以上，用于治療急慢性呼吸系統(tǒng)的感染，并以此為基礎(chǔ)申報了五類新藥。

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