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微生物揮發(fā)性代謝產(chǎn)物檢測及在食品安全監(jiān)測中的應(yīng)用研究

發(fā)布時間:2021-02-09 22:44 編輯者:余秀梅

 

食品安全與國計民生息息相關(guān),一旦處理不當(dāng)很容易引發(fā)嚴(yán)重的社會問題,激發(fā)社會矛盾。對此,本文對微生物揮發(fā)性代謝產(chǎn)物(MVOCs)檢測內(nèi)容與重要性進(jìn)行分析,并立足于當(dāng)前食品安全現(xiàn)狀,挖掘安全標(biāo)準(zhǔn)體系、安全檢測與生產(chǎn)中存在的問題,分別從食品包裝、貯藏、品質(zhì)口感以及腐敗菌鑒定等方面,探究食品安全檢測中的MVOCs檢測技術(shù),以期為食品污染檢測提供參考。

近年來,人們的物質(zhì)生活品質(zhì)不斷提升,對食品安全問題高度重視,同時也對安全檢測技術(shù)提出了更高的要求。微生物揮發(fā)性代謝產(chǎn)物(MVOCs)是真菌與細(xì)菌在代謝中產(chǎn)生的多樣揮發(fā)性化合物,是食品腐爛變質(zhì)的根源所在,容易引發(fā)食源性疾病,如腸道感染癥、食品中毒等等。對此,應(yīng)采取科學(xué)合理的檢測方式,有效控制微生物食品污染程度,使食品安全得到切實保障。

1 MVOCs檢測的內(nèi)容與重要性

當(dāng)前,食品安全檢測技術(shù)的重要性日益突顯,受到人們的高度重視。從檢測技術(shù)層面上看,該項技術(shù)可準(zhǔn)確全面檢測出食品中微生物的類型與含量,使食品安全得到切實保障,主要的檢測技術(shù)類型如下

(1)免疫學(xué)快速檢測技術(shù)。該項技術(shù)采用熒光標(biāo)記法,可分為直接法與間接法兩種,具有操作性強(qiáng)、方便快捷的特點(diǎn),但也存在些許不足,如檢測結(jié)果容易受到影響,對檢測設(shè)備要求較高等,在檢測中需要高倍顯微鏡的支持,導(dǎo)致檢測成本增加,可持續(xù)發(fā)展能力不強(qiáng)。

(2)分子生物學(xué)檢測技術(shù),該項技術(shù)包括多聚酶鏈?zhǔn)郊夹g(shù)、基因探針技術(shù)等。其中基因技術(shù)是通過帶有同位素標(biāo)記的探針與微生物基因的結(jié)合,對食品中微生物信息進(jìn)行獲取,該技術(shù)具有較強(qiáng)的時效性特征,應(yīng)用價值較高,但存在一定的安全隱患,尤其是帶有的放射性,可能危及檢測者身體健康;多聚酶鏈技術(shù)是以多聚酶為核心,在體外針對微生物特異基因進(jìn)行擴(kuò)增、檢測,由此獲取食物內(nèi)部微生物信息,該項技術(shù)操作簡便,檢測結(jié)果精準(zhǔn)度高,值得推廣使用。現(xiàn)階段,食品安全問題日益嚴(yán)峻,致使整個食品行業(yè)陷入低谷時期。為了改善生產(chǎn)現(xiàn)狀,需要發(fā)揮高科技食品安全檢測技術(shù)的作用,對腐敗變質(zhì)的食品進(jìn)行篩選,將食物污染問題扼殺在萌芽狀態(tài),杜絕食物中毒事件。食品安全關(guān)系到國計民生,只有不斷提高食品質(zhì)量,保障食品安全,才能使百姓吃得健康、放心。

2 當(dāng)前我國食品安全現(xiàn)狀

2.1 安全標(biāo)準(zhǔn)體系不健全

我國食品安全問題始終不斷,說明安全體制層面仍然存在不足。我國人口數(shù)量較多,分布范圍較廣,在制定安全標(biāo)準(zhǔn)時未能考慮到不同地區(qū)的個性需求,導(dǎo)致協(xié)調(diào)性不完善,食品問題多發(fā)。對此,國家食品部門應(yīng)對各地食品狀況進(jìn)行調(diào)查,根據(jù)各地實際情況展開綜合分析,由此制定更加科學(xué)適用的安全標(biāo)準(zhǔn)。

2.2 安全檢測存在漏洞

與發(fā)達(dá)國家相比,我國食品安全檢測仍然不夠完善,導(dǎo)致食品安全問題時有發(fā)生,盡管當(dāng)前檢測制度與以往相比更加規(guī)范,但仍存在一些漏洞。現(xiàn)階段,因化學(xué)制劑引發(fā)的食品安全事件發(fā)生概率降低,但因病原微生物引發(fā)的食品問題仍沒有得到有效控制,這就要求食品相關(guān)部門對檢測機(jī)制進(jìn)行優(yōu)化,對較為常見的腸出血性大腸桿菌、沙門氏菌等微生物給予高度重視。

2.3 違法違規(guī)生產(chǎn)存在

對于國內(nèi)許多偏遠(yuǎn)地區(qū)來說,食品生產(chǎn)條件未能達(dá)到安全標(biāo)準(zhǔn),仍存在不合法生產(chǎn)、加工現(xiàn)象,影響食品安全,且加工環(huán)境不達(dá)標(biāo),甚至存在無證經(jīng)營情況,不但擾亂了食品市場秩序,還對消費(fèi)者身體健康構(gòu)成了嚴(yán)重威脅。

3 MVOCs在食品安全檢測中的應(yīng)用

從整體來看,MVOCs在食品檢測領(lǐng)域可謂是一股新流,在監(jiān)督各類食品安全時具有精度高、靈敏度強(qiáng)的特點(diǎn),擁有良好的行業(yè)發(fā)展前景。長期以來,食品安全始終是熱點(diǎn)話題,消費(fèi)者在食品采購方面產(chǎn)生信任危機(jī)。對此,新技術(shù)的應(yīng)用與發(fā)展不但可提高食品安全問題,還可使食品安全現(xiàn)狀得到有效改善。

3.1 食品包裝

包裝作為食品商品的重要內(nèi)容,是食品工程的主要環(huán)節(jié)之一,可使食品在流通中避免受到物理、化學(xué)等外在因素的損害,有效抑制微生物的生長和發(fā)育。相關(guān)調(diào)查研究表明,在4℃環(huán)境下,分別對空氣、真空包裝下的肉類受污染情況進(jìn)行對比,結(jié)果顯示,在上述兩種包裝形式下MVOCs濃度均有所增加,尤其是空氣包裝狀態(tài)下的MVOCs排放量相對更大,假單胞菌揮發(fā)性有機(jī)物濃度與細(xì)菌量具有正比關(guān)系,如若濃度較高說明污染度更高。利用氣相色譜法對上述兩種包裝的貯藏效果進(jìn)行檢測,發(fā)現(xiàn)被酒石酸肉桿菌污染的肉質(zhì)樣品中帶有揮發(fā)性有機(jī)物,空氣狀態(tài)下有33種有機(jī)物,真空狀態(tài)下有24種,空氣中被污染的肉制品中帶有的揮發(fā)性物質(zhì)濃度均超過真空狀態(tài),尤其是丁酸、乙酸乙酯,均屬于MVOCs中的關(guān)鍵化合物。在某項研究中,對揮發(fā)性胺進(jìn)行檢測,對家禽肉在真空、空氣、改性大氣3類包裝形式下的腐爛變質(zhì)狀態(tài)進(jìn)行檢測。根據(jù)檢測結(jié)果可知,在貯藏全過程中,總揮發(fā)性鹽基氮含量顯著增加,且在改性大氣中檢測的TVB-N與TMA-N數(shù)值與其他兩種包裝相比較低。分別在空氣、改性大氣兩種狀態(tài)下,對海魚片中散發(fā)的MVOCs進(jìn)行檢測,共計檢測到44種MVOCs,主要為醛、酮、醇等。包裝是食品工業(yè)的最終工序,完整的包裝有助于抑制病原菌的繁殖,延長食品保質(zhì)期,便于后續(xù)運(yùn)輸與銷售。通過對多種包裝條件下產(chǎn)生的MVOCs成分、含量進(jìn)行檢驗,可準(zhǔn)確了解MVOCs污染程度,以此為依據(jù)調(diào)整食品生產(chǎn)模式,最大限度避免食品受到MVOCs的污染。

3.2 腐敗菌鑒定

從本質(zhì)來看,食品腐敗變質(zhì)主要是食品蛋白質(zhì)、脂肪等被微生物分解的過程。微生物含量測定與種類檢定,可反映食品被微生物污染度、變質(zhì)情況等,還可將其作為食品生產(chǎn)衛(wèi)生狀況與質(zhì)量的關(guān)鍵依據(jù)。

3.2.1 肉類食品

一般情況下,在肉類食品檢測中可以某相關(guān)微生物的MVOCs為指標(biāo)。例如,對牛肉中MVOCs進(jìn)行分析,重點(diǎn)探究其嗜冷、嗜溫細(xì)菌的腐敗潛力。根據(jù)研究結(jié)果可知,辛酸乙酯、壬酸乙酯、乙酸異戊酯等對受到大腸桿菌污染的肉制品具有特異性。此外,麥芽酒石酸桿菌有機(jī)揮發(fā)物中的醇類物質(zhì)含量較高,未發(fā)現(xiàn)2-乙基-1、2-乙醇-1-辛醇等物質(zhì);針對腌制火腿中MVOCs進(jìn)行深層腐敗表征分析,共計鑒定出70余種MVOCs,根據(jù)檢測結(jié)果可知,變質(zhì)火腿中的碳?xì)浠衔镎急忍嵘?,尤其?u>甲苯與間二甲苯含量最高,這主要受豬飼料影響;在對四類腐敗菌污染臘腸切片中釋放的MVOCs進(jìn)行研究時,針對百串珠菌等MVOCs構(gòu)成進(jìn)行評估,對40余種MVOCs進(jìn)行鑒定,發(fā)現(xiàn)其主要為白串珠菌,2,3-甲基丁醇等物質(zhì)。

3.2.2 水產(chǎn)品

此類產(chǎn)品富含大量營養(yǎng),口味不同,可使人類飲食得以均衡。水產(chǎn)品捕撈后,如若未及時采取保險措施,很容易腐爛變質(zhì)。究其原因,主要是微生物活動、化學(xué)氧化作用,但特定腐敗生物的活動與化學(xué)氧化、自溶相比更易導(dǎo)致腐敗。李俊杰學(xué)者采用HS-SPME-GC-MS(頂空固相微萃取結(jié)合氣質(zhì)聯(lián)用技術(shù))針對蚌肉貯藏周期內(nèi)腐敗菌的MVOCs進(jìn)行研究,發(fā)現(xiàn)存在40余種化合物,甲基苯酚、二甲基三硫化物屬于希瓦氏菌特有。假單胞桿菌、熱殺索絲菌為歐洲鱸魚優(yōu)勢菌,以異丁酸酯為潛在標(biāo)記物;以墨魚為對象,對其保質(zhì)期內(nèi)的腐敗菌進(jìn)行研究可知,嗜冷桿菌屬于該階段的主要腐敗菌,隨著存儲時間的延長,其濃度含量不斷提升,可將其作為墨魚潛在新鮮度指標(biāo)。

3.2.3 果蔬產(chǎn)品

此類產(chǎn)品中含有極多的水分,是生活活動的必需條件,可為微生物活動創(chuàng)造良好條件。因此,很容易導(dǎo)致腐敗變質(zhì)的情況發(fā)生,存儲期較短。利用SMPE-GC-MS法可針對導(dǎo)致水果腐爛的主要病原MVOCs進(jìn)行分析,根據(jù)病原體類型對比MVOCs的變化,發(fā)現(xiàn)苯甲醛、檸檬烯在衰變過程中屬于主要的MVOCs物質(zhì)。在李勤的研究中,利用電子鼻(E-nose)技術(shù)對西藍(lán)花冷藏狀態(tài)下的新鮮度進(jìn)行分析,將分析結(jié)果分為3種類型,即十分新鮮、中度新鮮與變質(zhì),隨著存儲時間的延長,二甲基二硫化物不斷積累。此外,針對變質(zhì)洋蔥樣品的MVOCs進(jìn)行檢驗,發(fā)現(xiàn)存在部分微生物與真菌,主要為曲霉、念珠菌與鐮刀菌等??梢?,通過對MVOCs進(jìn)行試驗分析,基本可以確定食品腐敗變質(zhì)相關(guān)MVOCs,可為后續(xù)單一菌種MVOCs研究打下堅實基礎(chǔ)。同時,以此為基礎(chǔ)構(gòu)建更多微生物氣味特征圖庫,可促進(jìn)微生物氣味檢測技術(shù)的快速發(fā)展。

3.3 風(fēng)味口感

當(dāng)前國民生活質(zhì)量提升,對食品方面給予了高度重視,不但要求外觀與營養(yǎng)價值得宜,還注重食物的口感與安全性。對此,在食品檢測中應(yīng)注重對食品風(fēng)味、口感的控制和評價,使食品更受大眾喜愛。

3.3.1 乳制品

此類食品的營養(yǎng)價值較高,含有人體代謝所需的全體營養(yǎng)元素,同時也為維生素滋生提供了溫床。當(dāng)牛奶受到微生物污染后,在溫度得宜的情況下,維生素會迅速繁殖,使牛奶變質(zhì)、變味,失去營養(yǎng)價值。相關(guān)研究中,采用頂空固相微萃法對牛奶中的MVOCs進(jìn)行分析,共計檢驗出19種化合物,對乳房鏈球菌、葡萄球菌、大腸桿菌等5類細(xì)菌進(jìn)行鑒定。在不同冷藏溫度下,對短青霉在多種類型酸奶中形成的MVOCs進(jìn)行分析,經(jīng)過21天的存儲后,共計發(fā)現(xiàn)存在30種MVOCs。根據(jù)研究結(jié)果可知,當(dāng)存儲時間越長時,營養(yǎng)物質(zhì)含量越低。酸奶中MVOCs主要出現(xiàn)以下變化:對于帶有蔗糖的酸奶來說,第5天時酒精含量達(dá)到29%;對于含有果糖的酸奶,在第5天時甲基酮含量達(dá)到90%,其2-戊酮含量較高;兩種酸奶中均帶有2-庚酮。自第5天后,酸奶樣品中2-庚酮、2-戊酮濃度逐漸降低,在某種特殊情況下,上述化合物在21天后難以滿足檢測標(biāo)準(zhǔn)。

3.3.2 飲料

此類產(chǎn)品同樣會受到微生物污染,出現(xiàn)腐敗變質(zhì)等情況,為產(chǎn)品帶來感官缺陷。相關(guān)研究中,采用兩種菌株對紅牛飲料中醋酸菌的腐敗程度進(jìn)行分析,在GC-TOF-MS(氣相色譜高通量飛行時間質(zhì)譜儀)檢測技術(shù)下,共計檢測出33種關(guān)鍵物質(zhì),如2-苯乙醇、3-戊酮等揮發(fā)物。再如,針對咖啡飲品中曲霉菌、青霉菌的MVOCs進(jìn)行分析。根據(jù)研究結(jié)果可知,青霉菌樣品中主要檢測出戊-2-酮、乙醇、辛-3-酮;在曲霉菌樣品中,只發(fā)現(xiàn)甲基丙醇、2-甲基-丁醇等物質(zhì)。食品味道與口感受到廣大消費(fèi)者的高度重視,且與食品銷量息息相關(guān)。在檢測過程中,與以往微生物菌落檢測相比,MVOCs儀器檢測更加便捷高效。前處理也相對容易,通過MVOCs檢測分析,可找到影響該食品味道、品質(zhì)的主要揮發(fā)成分,為快速檢測與鑒定食品中致病菌提供更多便利,同時也為預(yù)防病菌傳播提供強(qiáng)有力的技術(shù)支持。

3.4 食品儲藏

在MVOCs分析中,主要采用與某項微生物屬性相關(guān)的特異性MVOCs,對食品貯藏中污染程度進(jìn)行迅速準(zhǔn)確的檢測,并提早采取有效措施進(jìn)行處理,成為食品存儲期間預(yù)防微生物污染的有效措施。該項環(huán)節(jié)為食品流通的中間環(huán)節(jié),與生產(chǎn)、銷售、運(yùn)輸?shù)拳h(huán)節(jié)相關(guān)。在貯藏過程中,除采取措施避免受到化學(xué)污染、蟲鼠危害之外,還應(yīng)做好MVOCs的污染預(yù)防工作。以水果類食物為例,作為人類生活中不可或缺的副食品,在儲藏過程中的主要病害由微生物引發(fā),且在存儲初期具有較強(qiáng)的隱蔽性。在相關(guān)研究中,利用GC-MS法對紅蘋果接種4類真菌后,對MVOCs情況進(jìn)行對比。根據(jù)檢測結(jié)果可知,共計包括489類不同類型的MVOCs,其中梨狀毛霉菌特征物質(zhì)為丁酸丁酯、氟乙烯,乙酸甲酯對念珠菌具有特異性,可為后續(xù)果實采摘病害預(yù)防提供新思路。再如,以芒果為對象,對內(nèi)部蘊(yùn)含的感染焦腐病菌、炭疽桿菌中的MVOCs進(jìn)行研究,研究結(jié)果表明,1-戊醇對焦腐病菌具有特異性,帶有高含量揮發(fā)性成分。根據(jù)試驗結(jié)果可知,1,4-環(huán)已二烯、4-戊二烯等物質(zhì)可作為焦腐病菌的早期監(jiān)測指標(biāo)。又如,對腐爛番茄進(jìn)行研究時,發(fā)現(xiàn)含有1,2,3-三甲基苯、2-異丙烯基-5等多種MVOCs,且在果實中帶有單核細(xì)胞,可將上述代謝物作為生物標(biāo)記物,使番茄病原體得到早期檢測。

此外,谷類食物在存儲過程中也很容易受到微生物影響,MVOCs檢測成為早期糧食鑒別中的有效措施。在相關(guān)研究中,對受螨蟲、微生物污染的谷物、咖啡豆中的MVOCs進(jìn)行調(diào)查,共計發(fā)現(xiàn)50余種MVOCs存留在谷類食物中,且不同谷物中的表現(xiàn)有所不同,如白米、糙米、小麥醛類物等等,尤其是在粗米中,醇類物質(zhì)的比重較大,燕麥中主要為醇類與醛類。嘔吐毒素主要是谷物“鐮刀感染”后的產(chǎn)物,受污染小麥中具有70種MVOCs,主要為長葉烯、十三烷等等;利用SPME、GC-MS法針對兩株黃曲霉菌株在玉米上的代謝MVOCs進(jìn)行檢測,共計發(fā)現(xiàn)有52種MVOCs,可對不同菌株進(jìn)行準(zhǔn)確區(qū)分。在肉質(zhì)品貯藏中,主要針對腐敗三文魚樣品中的細(xì)菌產(chǎn)生的MVOCs進(jìn)行檢測。在溫度為5℃的環(huán)境內(nèi),共計檢測出38種MVOCs,主要為酯類、醛類、醇類等。在無菌冷熏三文魚樣品中,醇類物質(zhì)含量降低,這意味著此類MVOCs可能是腐敗微生物活動的產(chǎn)物。申丹寧學(xué)者以熟雞肉為例,利用頂空-固相微萃取技術(shù)在不同溫度范圍內(nèi),針對潛在的污染菌MVOCs進(jìn)行定性分析。根據(jù)研究結(jié)果可知,共計發(fā)現(xiàn)33種揮發(fā)物,主要為乙酰托因、1-辛醇等,可將其當(dāng)作家禽熟制品細(xì)菌生長的標(biāo)志物。

4 結(jié)論

綜上所述,當(dāng)前人們的健康意識不斷增強(qiáng),對食品安全給予高度重視。我國食品類型眾多,安全檢測十分耗時,可將食品安全理論與快檢技術(shù)相結(jié)合,為MVOCs分析檢測提供新思路,從根本上保障食品衛(wèi)生與安全,有效降低對人類健康的危害。將該項技術(shù)應(yīng)用到食品包裝、貯藏、口感風(fēng)味檢測中,并健全食品安全標(biāo)準(zhǔn)體系,加強(qiáng)食品生產(chǎn)過程監(jiān)管,由此促進(jìn)食品檢測效率的提升,推動食品行業(yè)的穩(wěn)健發(fā)展。

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