2石斛堿含量分布規(guī)律

作為金釵石斛總生物堿中最主要的特征性成分，石斛堿占金釵石斛總生物堿含量的92%以上。隨著對石斛堿研究的深入，在越來越多的石斛屬植物中檢測到石斛堿的存在，其含量主要受到石斛種類、植株部位、栽培條件、采收期及加工方式等多方面的影響。

2.1不同石斛種類對石斛堿的影響

王曉媛等比較了石斛屬6種石斛主要化學成分差異，包括線葉石斛(D.aurantiacum Rchb.f.)、蜻蜓石斛(D.pulchellum)、杓唇石斛［D.moschatum(Buch.-Ham.)Sw.］、疊鞘石斛(D.denneanum Kerr.)、流蘇石斛(D.fimbriatum Hook.)以及細葉石斛(D.han-cockii Rolfe)，采集部位為1年生莖段，結果發(fā)現(xiàn)，僅在線葉石斛中檢測到石斛堿存在，質量分數(shù)為0.02%，低于《中國藥典》規(guī)定。陳志輝等運用TLC對疊鞘石斛、流蘇石斛、金釵石斛的化學成分進行比較鑒定，結果發(fā)現(xiàn)，僅在金釵石斛中檢測出石斛堿色譜斑點，而流蘇石斛和疊鞘石斛中未發(fā)現(xiàn)石斛堿色譜斑點；李振堅等研究表明，目前僅石斛屬4個種中發(fā)現(xiàn)含有石斛堿，包括金釵石斛、矩唇石斛(D.linawianum Rchb.f.)、棒節(jié)石斛(D.findleyanum Par.et Rchb.f.)以及線葉石斛，鐵皮石斛(D.officinale Kimura et Migo)作為石斛市場的主流產品，雖然對其研究比較多，但是并未檢測到石斛堿的存在。陳曉梅等研究也表明，在鐵皮石斛中未能檢測出石斛堿，而石斛堿在金釵石斛中具有較高的含量；此外，HPLC-MS分析結果顯示，鐵皮石斛中總堿含量低、生物堿類化合物數(shù)量少。但近幾年，有相關研究報道稱在鐵皮石斛中檢測分離到石斛堿，如李海濤等從云南產鐵皮石斛組培苗中提取到石斛堿，提取率分別為根(0.06%)、莖(0.34%)、葉(0.00%)；徐德林等對采集到的9個來自云南和浙江不同石斛樣品中石斛堿含量進行測定，結果發(fā)現(xiàn)，不同石斛種之間的石斛堿含量具有較大的差異。其中，金釵石斛干燥莖中石斛堿含量均高于6.0 mg/g，而鐵皮石斛中石斛堿含量僅為金釵石斛的12%～46%；楊洋等、葛穎華等也在鐵皮石斛中檢測到石斛堿的存在。在其他研究相對較少的石斛品種中，也發(fā)現(xiàn)了石斛堿的存在。如姚春等對燈籠石斛組的7個石斛品種進行化學成分測定，發(fā)現(xiàn)在密花石斛(D.densiflorum Lindl.)(0.07%)和聚石斛(D.lindleyi Stendel)(0.02%)中檢測到石斛堿的存在，且含量較低。

隨著人工組培技術的發(fā)展，對于石斛品種的道地性產生了一定的沖擊和影響，加之石斛種類繁多、種質混雜，故造成以上現(xiàn)象的產生。筆者建議，未來可加大對于石斛品種鑒定的研究力度，如生物學特性分析、特征指紋圖譜構建以及DNA條形碼鑒定等；同時，在結合對石斛道地性的考慮分析基礎上，規(guī)范石斛組培技術的標準化，保障石斛組培苗質量。

2.2不同植株部位對石斛堿的影響

莖作為石斛的入藥部位，富含豐富的石斛堿，而研究表明，在金釵石斛的葉片、花和根中也檢測到石斛堿的存在。王憲楷等對栽培在10種木本植物上以及生長于石縫間的金釵石斛中石斛堿的含量進行研究，發(fā)現(xiàn)石斛堿含量莖＞葉的石斛栽培附生植物為烏柏、油桐、柿、楓楊、李和四川虎皮楠，莖＜葉的有棗、杏、香椿和梨，而石縫間野生的金釵石斛中石斛堿含量最高，分別為莖中含石斛堿(3.18%)、葉(0.83%)、根(0.08%)；胡志剛等研究發(fā)現(xiàn)，貴州赤水金釵石斛中石斛堿的含量分布規(guī)律為莖(0.63%)＞花(0.45%)；李華云等研究發(fā)現(xiàn)，四川瀘州和貴州赤水產的金釵石斛，只有莖中的石斛堿含量符合《中國藥典》規(guī)定，而葉和根中的石斛堿含量遠遠低于《中國藥典》標準?？傮w來說，石斛莖中石斛堿含量較石斛其他部位的含量高，再一次佐證了傳統(tǒng)醫(yī)藥學以及《中國藥典》中以石斛莖入藥的依據(jù)。

2.3不同栽培條件對石斛堿的影響

目前對于石斛屬植物的主要栽培方式可分為野生栽培、仿野生栽培以及人工溫室種植三大類型。徐曉林等對采集自17個不同地區(qū)的野生金釵石斛中石斛堿的含量進行分析，結果發(fā)現(xiàn)，廣西百色產金釵石斛中石斛堿含量高于其他地區(qū)，云南、貴州以及緬甸地區(qū)產金釵石斛中石斛堿含量差異較小，而西藏、四川以及海南地區(qū)金釵石斛中石斛堿含量未能達到藥典規(guī)定的0.40%；李文濤等利用偏最小二乘回歸法(PLS)對16份采集自不同省份的金釵石斛中化學成分及其與生態(tài)因子的相關性進行研究，結果表明，石斛堿含量為貴州(0.28 mg/g)＞廣西(0.25 mg/g)＞云南(0.24 mg/g)＞四川(0.23mg/g)。年降水量與石斛堿含量呈最大正相關性，其次為日照時長；土壤類型與石斛堿含量呈最大負相關，其次為濕度。VIP直方圖表明，土壤類型(1.730)、年降水量(1.592)和年均溫(1.041)的權重系數(shù)＞1，為影響石斛堿含量積累的主導因子；李在軍等研究發(fā)現(xiàn)，林下仿野生環(huán)境栽培的金釵石斛中石斛堿含量(0.18%)高于溫室內栽培的石斛(0.15%)；王憲楷等研究發(fā)現(xiàn)，石縫間野生的金釵石斛中石斛堿含量較高，優(yōu)于樹上栽培的石斛；任紅等研究發(fā)現(xiàn)，金釵石斛中石斛堿的含量分布為仿野生貼石栽培(0.82%)＞仿野生貼樹(0.60%)＞大棚離地床栽(0.53%)，這一結果與王憲楷研究結果相一致；牛曉娟等研究發(fā)現(xiàn)，培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)天數(shù)、初始pH以及搖床轉速均能對金釵石斛懸浮培養(yǎng)細胞中的石斛堿含量產生一定的影響。

Jin-ling Li等對培養(yǎng)在溫室中不同培養(yǎng)條件下的金釵石斛中石斛堿含量進行研究，結果發(fā)現(xiàn)，石斛莖中石斛堿含量在光照強度為75.02%時達到最高，而石斛葉片中石斛堿的含量在光照強度為39.74%時達到最高；魏明等研究發(fā)現(xiàn)，硝酸鑭濃度為5.0 mg/L時，可提高金釵石斛中多糖和石斛堿的含量；倪竹君等研究發(fā)現(xiàn)，石斛組培苗經5-氮雜胞苷(5-azaC)處理后，其石斛堿含量在每克干重材料中的占比在處理60 d和90 d后，分別達到0.17 mg/g和0.18 mg/g，為對照組的1.5、1.6倍；薛敏等［42］研究發(fā)現(xiàn)，利用不同種類的葉面肥對金釵石斛幼苗進行噴施處理之后，石斛莖中石斛堿含量依次為沼液肥(0.23%)＞葉面肥1(0.17%)＞葉面肥2(0.14%)＞多元素復合肥(0.13%)，與對照組(清水處理，0.09%)相比，分別增加石斛堿含量:155.56%、88.89%、55.56%、44.44%。由此可見，藥用石斛屬植物的產地、生態(tài)環(huán)境因子(土壤類型、年降水量、年均溫、日照時長、濕度等)、附生基質(巖壁、數(shù)載、棚栽等)以及人工栽培時的培養(yǎng)條件(光照強度、肥料、培養(yǎng)溫度、稀土元素、DNA化學修飾等)均能對其藥效成分產生一定的影響。

2.4不同采收期對石斛堿的影響

《中國藥典》中注明，金釵石斛、鼓槌石斛(D.chrysotoxum)、流蘇石斛及其近似種的新鮮或干燥莖全年均可采收，而建議鐵皮石斛的干燥莖在11月至翌年3月進行采收，不同采收期會對石斛屬植物中活性成分的含量產生一定的影響。蔡偉等比較測定同一產地金釵石斛莖中石斛堿含量，結果發(fā)現(xiàn)，1年生(0.55%)＞2年生(0.40%)＞4年生(0.36%)＞3年生(0.35%)；劉楊等研究發(fā)現(xiàn)，1年生金釵石斛莖中石斛堿含量最高(0.90%)，第2年進入生長期之后，其含量開始逐漸下降，最低為0.40%；顏壽等研究發(fā)現(xiàn)，四川省合江縣產的不同生長年限金釵石斛中石斛堿的含量依次為1年生(0.48%)＞2年生(0.44%)＞3年生(0.22%)。從石斛的采收月份來看，蔡莉等研究發(fā)現(xiàn)，貴州省赤水市旺隆鎮(zhèn)鴨嶺村和紅花村產的2年生金釵石斛莖中石斛堿含量在12月均達到最高值，分別為0.70%和0.64%，在8月(0.40%)和9月(0.41%)達到最低值；李金玲研究發(fā)現(xiàn)，1年生金釵石斛莖中石斛堿含量變化波動較大，出現(xiàn)了2次升高:第一次是在3—6月，石斛堿含量發(fā)生迅速的升高；第二次是在10—12月，石斛堿含量緩慢地升高；2年生金釵石斛莖中石斛堿含量在11月已超過《中國藥典》規(guī)定的0.40%、12月含量為0.49%、翌年1月含量超過0.50%，而2月含量卻低于0.40%。

總體來說，相比于其他年份采收的石斛屬植物而言，1年生該屬植物中石斛堿含量最高，具有較高的藥用價值。但是，由于人工栽培的石斛屬植物生產周期較長，石斛堿含量隨生長時間的動態(tài)變化規(guī)律還有待進一步的深入研究。故而，在確定石斛屬植物的合理采收期時，不應該僅僅以多糖、生物堿或石斛堿等某個單一指標來確定，應結合石斛生長特性以及干物質的積累量、藥效成分含量等多項指標進行綜合考慮。

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