3.2肝毒性研究

吳茱萸提取物大劑量單次給藥可造成肝臟損傷。大鼠單次灌胃給予吳茱萸70%乙醇提取物60g(生藥)/kg，可引起大鼠血清轉(zhuǎn)氨酶活性和肝臟指數(shù)增加，病理檢查發(fā)現(xiàn)中央靜脈周圍肝細(xì)胞變性、壞死。祝靚靚等發(fā)現(xiàn)小鼠給予吳茱萸水煎劑60g/kg以上劑量時，可引起小鼠血清轉(zhuǎn)氨酶活性和肝組織MDA水平升高，組織病理學(xué)檢查見肝組織腫脹和脂肪變性。重復(fù)給藥試驗發(fā)現(xiàn)，大鼠分別灌胃給予16.67、4.98、1.67g(生藥)/kg的吳茱萸水提取物，連續(xù)給30d時，血清生化學(xué)檢查即發(fā)現(xiàn)16.67g(生藥)/kg組大鼠血清谷草轉(zhuǎn)氨酶、總膽固醇升高，3個劑量組動物肝臟指數(shù)均升高。組織病理學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)部分動物肝細(xì)胞胞質(zhì)疏松，肝細(xì)胞灶性壞死;電鏡檢查顯示肝細(xì)胞染色質(zhì)呈現(xiàn)固縮凝聚，線粒有腫脹，肝細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)可見大量的脂滴。劉舒凌等研究發(fā)現(xiàn)將小鼠分別給予生吳茱萸組、甘草制吳茱萸組及鹽制吳茱萸3種吳茱萸炮制品，給藥15d后，每組小鼠血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)和天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶{AST)均顯著提高，說明3種吳茱萸炮制品均可造成肝損傷。周琦等以最大100g(生藥)/kg劑量的吳茱萸，小鼠連續(xù)灌胃8d，發(fā)現(xiàn)小鼠血清ALT、AST及肝臟指數(shù)均顯著升高，且成一定量效關(guān)系。孫向明等研究也發(fā)現(xiàn)大鼠分別灌胃給予吳茱萸醇提物12.5g(生藥)/kg和25g(生藥)/kg，給藥14d，檢查發(fā)現(xiàn)大鼠肝臟系數(shù)和血清中ALT、AST均明顯升高，高劑量組毒性反應(yīng)明顯高于低劑量組。病理學(xué)檢查顯示肝細(xì)胞有脂肪變性，炎性細(xì)胞的浸潤和小灶壞死，說明吳茱萸醇提物對大鼠可造成肝臟損傷。尹利順等也有研究發(fā)現(xiàn)吳茱萸揮發(fā)油組分也可造成動物肝損傷，大鼠分別灌胃吳茱萸揮發(fā)油給予0.12、0.06、0.012mL/kg給藥35d。檢測顯示大鼠血清中ALT、AST、堿性磷酸酶(ALP)、總蛋白(TP)均升高，肝臟指數(shù)升高，病理組織檢查發(fā)現(xiàn)0.12mL/kg組的大鼠肝臟出現(xiàn)，重度濁腫，部分嗜酸性變，并有大的灶性壞死，其余2組肝細(xì)胞呈現(xiàn)水樣、嗜酸性、玻璃樣變性，并有小出血灶、點狀壞死，肝臟間質(zhì)充血，部分細(xì)胞水腫或溶解消失。上述研究表明吳茱萸水提物，醇提物，揮發(fā)油均可造成動物肝損傷，表現(xiàn)為血清ALT，AST水平升高，肝臟組織脂肪變性和壞死。

3.3肝毒性機制研究

3.3.1過氧化損傷

谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)等為體內(nèi)氧化-抗氧化系統(tǒng)的重要參與物質(zhì)。正常情況下，機體內(nèi)的氧化系統(tǒng)和抗氧化系統(tǒng)是處于動態(tài)平衡的。GSH-Px、SOD活性和GSH含量下降以及MDA含量升高均說明機體內(nèi)自由基增加，機體氧化系統(tǒng)和抗氧化系統(tǒng)失衡。李曉宇等用吳茱萸揮發(fā)油灌胃小鼠連續(xù)7d。可致血清和肝組織內(nèi)MDA含量增加，SOD活性下降，肝組織及血中GSH含量下降，GSH-Px的活性下降。張晟瑞用3種吳茱萸炮制品水提物灌胃小鼠15d后，各炮制組與正常組比較均可明顯降低肝組織中SOD的活力，并顯著升高MDA含量。周璐等用吳茱萸水煎液連續(xù)灌胃小鼠21d后，造成小鼠肝損傷，同時檢測發(fā)現(xiàn)給藥小鼠肝組織中丙二醛(MDA)含量升高，SOD/MDA比值顯著下降，谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性明顯下降，且病理形態(tài)學(xué)出現(xiàn)肝細(xì)胞灶性壞死。有研究表明用吳茱萸水提物灌胃小鼠15d后，小鼠肝組織SOD的活力顯著降低，隨給藥劑量增大，各劑量組SOD水平降低程度增大。因此，吳茱萸的肝毒性與其引起的肝臟氧化應(yīng)激反應(yīng)有關(guān)，且具有一定量效關(guān)系。

3.3.2炎性反應(yīng)因子介導(dǎo)

炎性損傷是致肝損傷原因之一。IL-1β、IL-6及TNF-α等均是與炎性反應(yīng)密切相關(guān)的炎性反應(yīng)遞質(zhì)，這些炎性反應(yīng)遞質(zhì)能將炎性反應(yīng)信號進一步放大，促進肝細(xì)胞凋亡和壞死。劉舒凌等用吳茱萸水提物灌胃小鼠15d后，發(fā)現(xiàn)小鼠出現(xiàn)一定肝損傷且肝組織中TNF-α、IL-1β水平升高。研究表明生吳茱萸高、中、低劑量組均能顯著升高小鼠肝組織中TNF-α、IL-1β表達水平(P＜0.01)。周璐等用吳茱萸水煎液連續(xù)灌胃小鼠21d后，TNF-α，IL-1β，IL-6含量顯著升高，且具有一定的量效關(guān)系。另外，Erk1/2是TGFbeta-Ｒas-Erk1/2-Smad以及mTOＲ信號通路中的關(guān)鍵分子，介導(dǎo)細(xì)胞一系列的應(yīng)答，通過對這2條信號通路的影響，介導(dǎo)細(xì)胞炎性反應(yīng)和細(xì)胞凋亡關(guān)聯(lián)的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子。廖文強等用吳茱萸水提物和醇提物連續(xù)灌胃小鼠15d后，發(fā)現(xiàn)吳茱萸水提物和醇提物均可致小鼠肝臟磷酸化Erk1/2表達量顯著上調(diào)(P＜0.01)。綜上可以看到吳茱萸肝毒性的機制可能與炎性反應(yīng)因子的產(chǎn)生有關(guān)。

3.3.3線粒體損傷

線粒體是細(xì)胞生物氧化的主要場所，主要合成三磷酸腺苷(ATP)。ATP作為能量物質(zhì)在細(xì)胞生長、代謝過程中發(fā)揮重要作用。在藥物性肝損傷中，線粒體是藥物毒性作用的重要靶標(biāo)。蔡卿嫣用吳茱萸水提物灌胃大鼠15d后，檢測顯示肝臟組織中的ATP含量明顯減少，肝臟線粒體膜的通透性增加，并且膜電位降低，進而使細(xì)胞中的色素C釋放，肝細(xì)胞的抗氧化能力降低，電鏡觀察顯示大鼠肝臟線粒體出現(xiàn)不同程度的空泡樣變，且部分發(fā)生腫脹。此外，吳茱萸肝毒性機制可能還與其他亞細(xì)胞器，如染色質(zhì)有關(guān)。李莉等用吳茱萸水提物灌胃大鼠30d后，組織病理學(xué)檢查顯示肝細(xì)胞胞質(zhì)變得疏松，肝細(xì)胞有一定程度的灶性壞死，染色質(zhì)形態(tài)固縮凝聚，線粒體有腫脹，胞質(zhì)內(nèi)可見大量的脂滴。由此，吳茱萸毒性的機制可能與肝細(xì)胞中亞細(xì)胞器，特別是線粒體損傷相關(guān)。

3.3.4藥物-蛋白質(zhì)加合物的形成

人體內(nèi)代謝藥物的主要酶是細(xì)胞色素P450超家族(CYPs)。大多數(shù)藥物在體內(nèi)代謝為非活性代謝產(chǎn)物，而有些藥物通過CYPs的生物活性轉(zhuǎn)化為反應(yīng)性代謝產(chǎn)物(ＲMs)。ＲMs可以共價修飾蛋白質(zhì)，在藥物性肝損傷中起重要作用。ZhangFL等在研究中發(fā)現(xiàn)吳茱萸中的吳茱萸次堿的仲胺結(jié)構(gòu)可被CYPs酶活化為活性代謝物，并與大鼠肝細(xì)胞中CYPs和蛋白質(zhì)共價結(jié)合產(chǎn)生藥物-蛋白質(zhì)加合物。且研究發(fā)現(xiàn)吳茱萸次堿能抑制多種類型的CYPs活性，即CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19和CYP2E1，表明在多次氧化反應(yīng)中可以生成不止一種的代謝物?；钚源x物能消耗谷胱甘肽(GSH)，進而導(dǎo)致活性氧(ＲOS)過量產(chǎn)生，引起呼吸鏈功能障礙，細(xì)胞產(chǎn)生應(yīng)激，線粒體損傷，細(xì)胞膜損傷，最終致肝細(xì)胞損傷。另據(jù)ZhouSF等認(rèn)為藥物代謝物的選擇性蛋白質(zhì)共價結(jié)合可能導(dǎo)致選擇性器官毒性。藥物-蛋白質(zhì)加合物可能通過損害所修飾蛋白質(zhì)的生理功能或通過免疫介導(dǎo)機制引起毒性。

以上毒理學(xué)研究表明吳茱萸致毒機制與過氧化損傷、炎性反應(yīng)因子介導(dǎo)、線粒體損傷有關(guān)，吳茱萸中的生物堿可被CYPs活化為活性代謝物，繼而產(chǎn)生藥物-蛋白質(zhì)加合物，造成肝臟免疫損傷，可能是吳茱萸造成的肝損傷的分子起始事件。

4展望

吳茱萸化學(xué)成分復(fù)雜，隨著近代分析技術(shù)的逐步提升和進步，研究者們在吳茱萸中不斷分離鑒定出新化合物，使得吳茱萸所含的化學(xué)成分譜更加清晰和全面。吳茱萸在臨床上有多種藥效作用，研究人員基于吳茱萸的化學(xué)成分開展了大量的體內(nèi)外藥效研究，除發(fā)現(xiàn)吳茱萸堿和吳茱萸次堿為其主要活性成分外，還發(fā)現(xiàn)了吳茱萸其他成分的藥效活性，為吳茱萸臨床廣泛應(yīng)用提供了理論依據(jù)。但是現(xiàn)有吳茱萸毒性研究尚未能確定吳茱萸的主要毒性成分，有研究認(rèn)為吳茱萸潛在毒性成分可能不唯一，可能存在多種毒性成分。因此，找到吳茱萸的毒性物質(zhì)基礎(chǔ)，并在此基礎(chǔ)上發(fā)現(xiàn)吳茱萸的毒性劑量和致毒機制，有利于進一步闡明吳茱萸毒性作用，為臨床安全合理用藥提供必要的指導(dǎo)。

聲明：本文所用圖片、文字來源《世界中醫(yī)藥》2020年12月，版權(quán)歸原作者所有。如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題，請與本網(wǎng)聯(lián)系
 

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