沙棘（拉丁名：HippophaerhamnoidesL）為胡頹子科沙棘屬植物，別名醋柳，是一種落葉性灌木，不僅被開發(fā)成沙棘食品，也被中國中醫(yī)藥典和世界藥典廣泛人藥，是一種藥食同源植物。中國的沙棘資源極其豐富，大力開發(fā)沙棘制品，提高其附加價(jià)值具有重要意義。沙棘葉因其豐富的活性成分，具有獨(dú)特的藥理功效，開發(fā)沙棘葉食用及藥用產(chǎn)品，需要對(duì)沙棘葉的活性成分進(jìn)行更為精準(zhǔn)有效的提取分析。黃酮作為沙棘葉的重要成分，有很高的藥用價(jià)值和食用保健價(jià)值，醫(yī)學(xué)研究表明，黃酮類化合物具有抗心肌缺血、抗氧化、抗疲勞、抗腫瘤、抗菌、降血糖、降血脂、消除體內(nèi)自由基等作用。因此，研究沙棘葉中黃酮化合物的提取，開發(fā)沙棘食品及藥品有著重要的意義。

離子液體是指由有機(jī)陽離子和陰離子（無機(jī)或有機(jī)）組成的一類熔融鹽，是一類極具廣泛利用前景及發(fā)展?jié)摿Φ木G色環(huán)保溶劑。與傳統(tǒng)有機(jī)溶劑相比，離子液體具有沸點(diǎn)高、熱穩(wěn)定性好、液態(tài)范圍寬、不易燃、不揮發(fā)、溶解能力強(qiáng)等優(yōu)良特性。此外，離子液體對(duì)微波具有強(qiáng)的吸收和熱轉(zhuǎn)換能力。而微波輔助提取天然產(chǎn)物中有效成分的技術(shù)又具備快速、清潔、高效、提取率高、溶劑用量少、操作簡便等優(yōu)點(diǎn)。近年來，結(jié)合二者的特點(diǎn)，將微波一離子液體輔助提取技術(shù)應(yīng)用在天然產(chǎn)物有效成分分離與提取不斷見諸于文獻(xiàn)報(bào)道。目前，沙棘葉總黃酮的提取方法主要有水提法、有機(jī)溶劑提取法、超聲波輔助提取法、微波輔助提取法和超臨界流體萃取法?；谡n題組對(duì)離子液體及沙棘的研究，本研究將咪唑類離子液體用于沙棘葉總黃酮的提取，考察微波時(shí)間、微波功率、微波溫度、料液比以及離子液體溴化1-十二烷基-3-甲基咪唑濃度對(duì)提取效果的影響，通過正交試驗(yàn)優(yōu)化最佳提取條件，為沙棘葉的開發(fā)和有效利用提供方法和理論依據(jù)。

一、材料與方法

1、材料與儀器

（1）主要試劑

沙棘葉（采自山西省偏關(guān)縣）；蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品（純度≥95％，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）（日本東京化成工業(yè)株式會(huì)社）；N-甲基咪唑（上海麥克林生化科技有限公司）；甲苯（天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司）；溴代乙烷、溴代正丁烷、溴代正己烷、溴代正辛烷、溴代正癸烷、溴代十二烷（天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所）。

（2）主要儀器

XH200A電腦微波固液相合成/萃取儀（北京祥鵠科技發(fā)展有限公司）；UV一2550紫外-可見分光光度計(jì)（島津公司）；OE一100克樣品粉碎機(jī)（浙江省武義縣屹立工具有限公司）；科華KHBST一360酶標(biāo)儀（上?？迫A實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)有限公司）。

2、方法

（1）咪唑類離子液體的合成

參照文獻(xiàn)合成方法，準(zhǔn)確量取50mL甲苯、20mL（0.25m01）Ⅳ-甲基咪唑于250mL的兩口圓底燒瓶中，然后將0.25mol溴代烴滴加于反應(yīng)瓶中，氮?dú)獗Ｗo(hù)下，緩慢升溫至95℃，在此溫度下攪拌回流48h，冷卻至室溫，快速傾去上層甲苯層，將下層淺黃色液體用30mL乙酸乙酯洗滌3次，將洗滌后的產(chǎn)品抽真空干燥處理12h，幾乎以定量的產(chǎn)率得6種咪唑類離子液體。

（2）蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線制作

用60％的乙醇配制質(zhì)量濃度為0.402mg·mL^-1的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液。取6個(gè)25mL的容量瓶，分別移入0mL、lmL、2mL、3mL、4mL、5mL上述標(biāo)準(zhǔn)溶液。加入顯色劑后用60％乙醇定容至25mL。于510nm處測吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得回歸方程為：y=10.771x+0.0202，R²=0.9997。

（3）總黃酮含量及提取率測定

于100mL圓底燒瓶中加入1.00g磨碎的未洗陰干沙棘葉，在不同條件下提取總黃酮，冷卻后減壓抽濾，濾餅用60％乙醇洗滌三次，所得濾液用60％乙醇定容到100mL容量瓶中。量取lmL提取液于25mL容量瓶中，然后加入顯色劑，用60％的乙醇定容至刻度。以0mL提取液為參比，測定其吸光度值。三次平行試驗(yàn)后求平均值。

參考文獻(xiàn)得，沙棘葉總黃酮提取率計(jì)算式：

c：沙棘葉中總黃酮濃度，單位：mg·mL^-1；N：稀釋倍數(shù)，v：樣品體積，單位：mL；m：沙棘葉質(zhì)量，單位：g。

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