渾濁紅球菌PD630在培養(yǎng)基中降解AFB1的效果與培養(yǎng)基中AFB1濃度密切相關(guān)。如圖5所示，當(dāng)培養(yǎng)基中的AFB1濃度為0.25、0.5μg/mL時(shí)，AFB1含量在24h內(nèi)急劇減少，含量分別為18.14%、26.12%，36h～72h降解效果逐漸趨于穩(wěn)定，72h后含量分別穩(wěn)定在3.90%和6.45%。當(dāng)培養(yǎng)基濃度為1、2μg/mL時(shí)，在24h內(nèi)AFBI的降解趨勢較為平緩，培養(yǎng)72h后AFB1含量為19.52%及33.59%?？梢缘贸?，當(dāng)培養(yǎng)基中的AFB1濃度較低時(shí)，降解是一個(gè)快速的過程，而當(dāng)培養(yǎng)基中的AFBI濃度較高時(shí)，則降解過程相對(duì)變得緩慢。張銘的研究結(jié)果顯示出相似的趨勢，當(dāng)培養(yǎng)基中AFB1濃度較低時(shí)（50、100、200、500ng/mL），短黃桿菌3J2M0降解速率較快，而當(dāng)AFB1濃度增加到1000ng/mL時(shí)則降解速率顯著降低。
 

6、無細(xì)胞.上清、菌細(xì)胞懸液、胞內(nèi)裂解物對(duì)黃曲霉毒素B1的降解活性

目前，對(duì)微生物脫除毒素的機(jī)制研究有兩點(diǎn)：一種是細(xì)菌菌體細(xì)胞壁的吸附作用，主要是通過細(xì)胞壁上β-葡聚糖、肽聚糖等多糖或功能蛋白的疏水相互作用進(jìn)行吸附，常見的菌種如乳酸菌、酵母菌等。二是通過菌體培養(yǎng)過程所產(chǎn)生的胞內(nèi)或胞外活性物質(zhì)，破壞毒素結(jié)構(gòu)從而起到降解作用，常見的菌種例如芽孢桿菌、假單胞菌等。如圖6所示，PD630無細(xì)胞上清對(duì)AFB1的降解活性顯著高于菌細(xì)胞懸液、胞內(nèi)裂解物。上清液培育72h后AFB1的殘留率僅為18.33%，而菌細(xì)胞懸液和胞內(nèi)提取物處理72h后AFB1殘留率為48.79%及90.18%。結(jié)果表明PD630菌株對(duì)AFB1的脫除機(jī)制是降解作用而非吸附作用，且參與AFB1降解作用的活性成分主要存在于上清液中。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，YanliXie等研究發(fā)現(xiàn)，Pantoeasp.T6的無細(xì)胞上清液對(duì)AFB1的降解活性（68.30%）顯著高于活細(xì)菌細(xì)胞（4.87%）和細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞提取物（3.68%）。K.RakshaRao等從鹿糞便中分離的地衣芽孢桿菌CFR1無細(xì)胞上清在72h溫育后上清液降解活性達(dá)到93.67%，表明降解作用主要發(fā)生于地衣芽孢桿菌CFR1的無細(xì)胞上清中。

7、PD630菌株無細(xì)胞上清液對(duì)黃曲霉毒素B1的降解效果

如圖7所示，PD630培養(yǎng)上清液對(duì)AFB1的降解是一個(gè)快速的降解過程。在培育36h后AFB1的含量降低到28.72%并趨于穩(wěn)定，在培育72h后AFB1的含量僅為17.49%。與圖2相比，培養(yǎng)上清液處理AFB1的速率加快，PD630菌株培養(yǎng)48h后，培養(yǎng)基中AFB1的含量顯著性降低，AFBI殘留率僅為10.58%。當(dāng)培養(yǎng)時(shí)間達(dá)72h后，AFB1殘留率穩(wěn)定在6.96%。實(shí)驗(yàn)證明，渾濁紅球菌PD630菌株可以有效用于AFB1污染底物的生物修復(fù)。已有文獻(xiàn)報(bào)道關(guān)于AFB1的生物修復(fù)作用，XiaoshuangXia等人從土壤中篩選出一株枯草芽孢桿菌JSW-1，在AFB1終濃度為2.5μg/mL的NB培養(yǎng)基中培養(yǎng)72h后AFB1降解率為67.2%。SilivanoE.Mwakinyali等人研究發(fā)現(xiàn)短黃桿菌3J2M0在AFB1污染濃度為0.1μg/mL的LB培養(yǎng)基中溫育48h后，降解率可以達(dá)到93.82%。菌株與AFB1共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)顯示培養(yǎng)48h后降解趨于穩(wěn)定，而上清液處理36h后降解效果則開始趨于穩(wěn)定。

8、加熱、EDTA蛋白酶K對(duì)無細(xì)胞上清降解黃[曲霉毒素B1活性的影響

如圖8所示，當(dāng)無細(xì)胞上清中加入蛋白酶K和EDTA處理后時(shí)，上清降解AFB1的能力顯著降低。與不作任何處理的空白無細(xì)胞上清組相比，蛋白酶K處理后AFB1降解效果明顯降低，表明無細(xì)胞上清中存在蛋白質(zhì)或者酶活性成，分參與了AFB1的降解。而加人作為金屬螯合劑的EDTA后，溫育結(jié)束后AFB1的含量甚至高達(dá)79.58%，這說明無細(xì)胞上清中的活性成分需要一些金屬陽離子輔助降解AFB1。最值得注意的是，當(dāng)加熱處理（煮沸處理20min及1210C高溫高壓處理10min）無細(xì)胞上清時(shí)，上清降解AFB1的活性仍然存在，可以推測上清中參與AFB1降解的蛋白質(zhì)或者酶活性成分具有優(yōu)秀的熱穩(wěn)定性。這種現(xiàn)象在文獻(xiàn)中有所報(bào)道，CuiqiongWang等發(fā)現(xiàn)鐮刀菌WCQ3361的無細(xì)胞上清液具有高熱穩(wěn)定性，煮沸10min后仍然保持99.40%的AFB1高降解活性。LancineSangare等發(fā)現(xiàn)銅綠假單胞菌N-17的無細(xì)胞上清用蛋白酶K處理后，降解率顯著下降；而上清液經(jīng)過熱處理后（沸水浴10min），刺激提升了AFB1的降解活性，表明N17-1菌株降解AFB1有關(guān)的蛋白質(zhì)或酶是熱穩(wěn)定的。XianShu等發(fā)現(xiàn)，貝萊斯芽孢桿菌DY3108（BacillusvelezensisDY3108）的培養(yǎng)上清液經(jīng)過熱處理后，降解能力被刺激提升，從而推測為酶的熱活化（Thermalactivationofenzymes）現(xiàn)象。依據(jù)XianShu等的說法，由于大多數(shù)酶不能忍受工業(yè)生產(chǎn)苛刻的環(huán)境條件，因此熱穩(wěn)定酶因其耐熱性可以作為優(yōu)秀的酶催化劑替代品，承受工業(yè)過程中的苛刻反應(yīng)條件，對(duì)最終應(yīng)用十分有益。PD630菌株降解AFB1的酶活性成分的熱穩(wěn)定性使其潛在應(yīng)用價(jià)值大大提高。

聲明：本文所用圖片、文字來源《中國食品添加劑》，版權(quán)歸原作者所有。如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題，請(qǐng)與本網(wǎng)聯(lián)系

相關(guān)鏈接：黃曲霉毒素b1，β-葡聚糖，地衣芽孢桿菌