(三)蒸餾法

蒸餾法是莉用被測物質(zhì)中各種組分揮發(fā)性的不同進(jìn)行分離的一種方法。該方法可以除去干擾物質(zhì)，也可以用于被測組分的蒸餾逸出，收集餾出液進(jìn)行分析(如啤酒酒精含量的測定)。

1、常壓蒸餾

為一般蒸餾方式，多數(shù)沸點(diǎn)較高，熱穩(wěn)定性好的成分可以采用這種方式。加熱方式可以根據(jù)蒸餾物的沸點(diǎn)和特性不同可以選擇水浴、油浴或直接加熱。

2、減壓蒸餾

某些被測物質(zhì)熱穩(wěn)定性差，容易分解或沸點(diǎn)過高，可以采用減壓蒸餾。減壓裝置可以采用水泵或真空泵。

3、水蒸氣蒸餾

某些物質(zhì)沸點(diǎn)很高，直接加熱時，由于受熱不均勻會出現(xiàn)局部炭化或出現(xiàn)在沸點(diǎn)時發(fā)生分解，可以采用水蒸氣蒸餾(如啤酒中雙乙酰含量的測定、食醋中揮發(fā)酸含量的測定等)。

4、分餾

應(yīng)用分餾柱將幾種沸點(diǎn)相近的混合物進(jìn)行分離的方法稱為分餾。在分餾柱內(nèi)，當(dāng)上升的蒸氣與下降的冷凝液互相接觸時，上升的蒸氣部分冷凝放出熱量使下降的冷凝液部分氣化，兩者之間發(fā)生熱量交換，其結(jié)果，上升蒸氣中易揮發(fā)組分增加，而下降的冷凝液中高沸點(diǎn)組分(難揮發(fā)組分)增加，如此繼續(xù)多次，就等于進(jìn)行了多次的氣液平衡，即達(dá)到了多次蒸餾的效果。這樣靠近分餾柱頂部易揮發(fā)物質(zhì)的組分比率高，而在燒瓶里高沸點(diǎn)組分(難揮發(fā)組分)的比率高。這樣只要分餾柱足夠高，就可將這種組分完全徹底分開。

蒸餾和分餾的基本原理是一樣的，都是利用有機(jī)物質(zhì)的沸點(diǎn)不同，在蒸餾過程中低沸點(diǎn)的組分先蒸出，高沸點(diǎn)的組分后蒸出，從而達(dá)到分離提純的目的。不同的是，分餾借助于分餾柱使一系列的蒸餾不需多次重復(fù)，一次得以完成(分餾即多次蒸餾)；應(yīng)用范圍也不同，蒸餾時混合液體中各組分的沸點(diǎn)要相差30℃以上才可以進(jìn)行分離，而要徹底分離，沸點(diǎn)要相差110℃以上，而分餾可使沸點(diǎn)相近的互溶液體混合物(甚至沸點(diǎn)僅相差1~2℃)得到分離和純化。

5、掃集共蒸餾法

一種專用設(shè)備，管式蒸餾器后接冷凝裝置與微型層析柱。多用于測食品中殘存農(nóng)藥的含量。特點(diǎn)：需樣量少，用注射器加料，節(jié)省溶劑，速度快，自動化式5~6s測一個樣，有20條凈化管道。

(四)溶劑提取法

1、浸提法

(1)溶劑分層法：在同一溶劑中，不同的物質(zhì)具有不同的溶解度。利用樣品各組分在某一溶劑中溶解度的差異，將各組分完全或部分地分離的方法，稱為溶劑分層法。此法常用于維生素、重金屬、農(nóng)藥及黃曲霉毒素的測定。

(2)浸泡法：用適當(dāng)?shù)娜軇⒐腆w樣品中的某種待測成分浸提出來的方法稱為浸泡法，又稱液-固萃取法。

(3)索氏提取法：將一定量樣品放入索氏提取器中，加入溶劑加熱回流一定時間，將被測成分提取出來。此法溶劑用量少，提取完全，回收率高。但操作較麻煩，且需專用的索氏提取器。

2、溶劑萃取法

領(lǐng)用某組分在兩種互不相容的溶劑中分配系數(shù)的丕回，使其從一種溶劑轉(zhuǎn)移到另一種溶劑中，而與其他組分分離的方法，稱為溶劑萃取法。此法操作迅速，分離效果好，應(yīng)用廣范。但萃取試劑通常易燃，易揮發(fā)，旦有毒性。

(1)萃取溶劑的選擇：萃取用溶劑應(yīng)與原溶劑不互溶，對被測組分有最大溶解度，而對雜質(zhì)有最小溶解度。即被測組分在萃取溶劑中有最大的分配系數(shù)，而雜質(zhì)只有最小的分配系數(shù)。經(jīng)萃取后，被測組分進(jìn)入萃取溶劑中，即同仍留在原溶劑中的雜質(zhì)分離開。此外，還應(yīng)考慮兩種溶劑分層的難易以及是否會產(chǎn)生泡沫等問題。

(2)萃取方法：萃取通常在分液漏斗中進(jìn)行，一般需經(jīng)4~5次萃取才能達(dá)到完全分離的目的。當(dāng)用比水輕的溶劑從水溶液中提取分配系數(shù)小或振蕩后易乳化的物質(zhì)時，采用連續(xù)液體萃取器較分液漏斗效果更好。

3、搗碎法

將切碎的樣品放入搗碎機(jī)中加溶劑搗碎一定時間，使被測成分提取出來。此法回收率較高，但干擾雜質(zhì)溶出較多。

一般來說，提取劑的提取效果符合相似相溶的原則，故應(yīng)根據(jù)被提取物的極性強(qiáng)弱選擇提取劑。對極性較弱的成分(如有機(jī)氯農(nóng)藥)可用極性小的溶劑(如正己烷、石油醚)提取，對極性強(qiáng)的成分(如黃曲霉毒素B)可用極性大的溶劑(如甲醇與水的混合溶液)提取。溶劑~沸點(diǎn)宜在45~80℃，沸點(diǎn)太低易揮發(fā)，沸點(diǎn)太高則不易濃縮，且對熱穩(wěn)定性差的被提取成分也不利。此外，溶劑要穩(wěn)定，不與樣品發(fā)生作用。

4、振蕩浸漬法

將樣品切碎，放在一合適的溶劑系統(tǒng)中浸漬、振蕩一定時間，即可從樣品中提取出被測成分。此法簡便易行，但回收率較低。

(五)鹽析法(沉淀反應(yīng))

向溶液中加入某種無機(jī)鹽，使溶質(zhì)在原溶劑中的溶解度大大降低而從溶液中沉淀析出，稱為鹽析法。在試樣中加入適當(dāng)?shù)某恋韯贡粶y組分沉淀下來或?qū)⒏蓴_組分沉淀下來，再經(jīng)過濾或離心把沉淀和母液分開。如在蛋白質(zhì)溶液中加人大量鹽(如硫酸鈉、氯化銨等)，特別是重金屬鹽 (堿性硫酸銅、堿性醋酸鉛等)，使蛋白質(zhì)從溶液中沉淀析出，分離沉淀后進(jìn)行測定。

在進(jìn)行鹽析時，應(yīng)注意溶液中所要加入的無機(jī)鹽的選擇，要求其不能破壞溶液中要析出的物質(zhì)，不然達(dá)不到鹽析提取物質(zhì)的目的。

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