5、膠體金標(biāo)記免疫分析：膠體金標(biāo)記免疫分析(colloidal gold immurtoassay，CGIA)通常采用紫紅色的納米金顆粒來標(biāo)記抗體，當(dāng)金標(biāo)抗體聚集到一定密度時，出現(xiàn)肉眼可以觀察的紫紅色，從而可對抗原抗體反應(yīng)結(jié)果進(jìn)行定性測定或半定量測定。藥物、激素等小分子化合物的膠體金標(biāo)記免疫分析通常采用競爭方式，實際測定方法有斑點滲漏法和免疫色譜法。

(1)斑點滲漏法：在一個塑料小盒內(nèi)填充吸水性較強(qiáng)的墊料，緊貼墊料中部粘貼一片硝酸纖維(nitrocellulose，NC)膜，在膜中心吸附包被原(CAg)，邊上吸附二抗(Abz)。洗滌去除游離物，封閉硝酸纖維膜上剩余的吸附位點。將待測樣品與金標(biāo)抗農(nóng)藥抗體(金一Ab)的混合液滴在硝酸纖維膜的中心，樣品中的農(nóng)藥與包被原競爭結(jié)合金標(biāo)抗農(nóng)藥抗體。洗滌去除游離物。若樣品中不含待測農(nóng)藥，則硝酸纖維膜中心呈現(xiàn)紅色斑點(金-AbCAg)；若硝酸纖維膜中心不顯色或比空白樣品顯色淺，表明樣品中待測農(nóng)藥陽性。膜邊緣呈現(xiàn)紅色斑點(金-Ab-Ab₂)，表明金標(biāo)抗農(nóng)藥抗體(金-Ab)有效，用作金標(biāo)抗農(nóng)藥抗體的質(zhì)控點。

(2)免疫色譜法：免疫色譜法以測試條作為載體，將適量金標(biāo)抗農(nóng)藥抗體(金-Ab)吸附于測試條中下端的玻璃纖維上，將適量包被原(CAg)吸附于測試條中端的硝酸纖維膜上，測試條中上端則吸附適量二抗(Ab₂)。在測試條最下端的樣品墊上滴加待測樣品溶液或?qū)悠穳|浸入待測樣品溶液中，隨著溶液向上擴(kuò)散，玻璃纖維上的金標(biāo)抗農(nóng)藥抗體溶解，與樣品中的相應(yīng)農(nóng)藥結(jié)合并隨液體繼續(xù)上行。若金標(biāo)抗農(nóng)藥抗體上的農(nóng)藥結(jié)合位點被樣品中的相應(yīng)農(nóng)藥完全或部分占據(jù)，金標(biāo)抗農(nóng)藥抗體就不能或只有部分能與固定在測試條中端的包被原結(jié)合，因而不顯色或顯色淺，即呈陽性。若樣品中不含相應(yīng)農(nóng)藥，則上行的金標(biāo)抗農(nóng)藥抗體與固定在測試條中端的包被原結(jié)合形成金-Ab一CAg復(fù)合物而顯紫紅色，即呈陰性。如金標(biāo)抗農(nóng)藥抗體與測試條中上端的二抗結(jié)合并顯色，表明金標(biāo)抗農(nóng)藥抗體具有免疫學(xué)活性，二抗吸附點用作金標(biāo)抗農(nóng)藥抗體的質(zhì)控點，二抗不顯色表明測試條失效。

金標(biāo)免疫色譜結(jié)果可用肉眼觀察，不需要貴重檢測儀器，操作簡便快速，可進(jìn)行定性測定或半定量測定，金-抗體-抗原復(fù)合物顏色穩(wěn)定不變，檢測結(jié)果可以長期保存。

6、親和素生物素系統(tǒng)酶聯(lián)免疫分析：親和素生物素系統(tǒng)(avidin-biotin system，ABS)中的親和素是一種糖蛋白，相對分子質(zhì)量約65 000，每個親和素分子由4個能和生物素結(jié)合的亞基組成。生物素分子中含活性羧基，相對分子質(zhì)量小(244)，標(biāo)記方法簡便，生物素羥基琥珀酰亞胺酯可與蛋白質(zhì)、糖等多種類型的大小分子形成生物素標(biāo)記物。生物素與親和素的結(jié)合具有很強(qiáng)的特異性，其親和力較抗原抗體反應(yīng)大得多，兩者一經(jīng)結(jié)合就極為穩(wěn)定。由于一個親和素可與4個生物素分子結(jié)合，因此可以利用親和素生物素酶系統(tǒng)來放大酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)信號，靈敏度可提高8～10倍?，F(xiàn)在常用的是親和素生物素系統(tǒng)酶聯(lián)免疫分析(ABS—ELISA)包括酶標(biāo)記親和素生物素(LAB)系統(tǒng)和橋聯(lián)親和素生物素復(fù)合物(AB*C)系統(tǒng)。由于親和素生物素系統(tǒng)酶聯(lián)免疫分析較普通酶聯(lián)免疫吸附測定多用了兩種試劑，增加了操作和反應(yīng)步驟，在農(nóng)藥分析中應(yīng)用的報道不多。

(七)其他免疫分析技術(shù)

1、脂質(zhì)體放大免疫分析:脂質(zhì)體是一種人工合成的模擬生物膜，由磷脂分散在水介質(zhì)中形成密閉的雙分子單層或多層膜。在脂質(zhì)體表面修飾抗原或抗體，當(dāng)發(fā)生抗原抗體反應(yīng)時，脂質(zhì)體表面的抗原抗體復(fù)合物可激活補(bǔ)體，引起脂質(zhì)體的溶解，釋放出包容在脂質(zhì)體內(nèi)的標(biāo)記物(如熒光素等)，標(biāo)記物的釋放量與膜表面抗原抗體復(fù)合物的形成量呈正比，據(jù)此建立了脂質(zhì)體免疫分析法(1iposome immunoassay，UA)。脂質(zhì)體膜內(nèi)可包容上萬個標(biāo)記物分子，具有很高的信號放大作用，因而成為提高免疫分析靈敏度的有效途徑之一。

2、控溫相分離免疫分析：控溫相分離免疫分析是將抗原或抗體固定在智能型水凝膠上，使其在水中快速反應(yīng)。反應(yīng)結(jié)束后，改變水凝膠的低臨界相變溫度(1owr critical solutiontemperature，LCST)，使復(fù)合物隨凝膠沉淀而析出，從而達(dá)到與游離物分離并濃縮抗原抗體復(fù)合物的目的，然后再進(jìn)行檢測，可顯著提高檢測靈敏度。

3、毛細(xì)管電泳免疫分析：毛細(xì)管電泳免疫分析(capillary electrophoresis immLmoassay，CEIA)是將毛細(xì)管電泳強(qiáng)大的分離能力和免疫分析的特異性相結(jié)合的免疫分析技術(shù)。將含目標(biāo)分析抗原(或抗體)的樣品提取液經(jīng)毛細(xì)管電泳分離，再與相應(yīng)的抗體(或抗原)反應(yīng)，可對復(fù)雜抗原或抗體進(jìn)行檢測。毛細(xì)管電泳免疫分析樣品用量少，檢測靈敏度高，在臨床檢驗中得到了廣泛的應(yīng)用，在農(nóng)藥等小分子化合物的痕量分析中具有一定的開發(fā)應(yīng)用價值。

4、流動注射免疫分析：流動注射免疫分析(flow-injection immunoassay，F(xiàn)IIA)分為均相流動注射免疫分析和非均相流動注射免疫分析，通常采用標(biāo)記物。非均相流動注射免疫分析將抗體固定在載體膜上，制成均勻一致可分段使用的抗體膜帶。將膜帶的一部分安裝于密封的微型槽內(nèi)，由流動注射儀將待測物輸入槽內(nèi)，與標(biāo)記過的待測物標(biāo)樣競爭結(jié)合固定在膜上的抗體，液相中(或固相上)標(biāo)記物濃度的變化程度與待測物的濃度相關(guān)，通過配套的檢測系統(tǒng)檢測。均相流動注射免疫分析是在微槽內(nèi)進(jìn)行的均相免疫反應(yīng)，檢測反應(yīng)前后標(biāo)記物信號的變化。流動注射儀通過計算機(jī)程序精確控制反應(yīng)液的種類、流向、流速、反應(yīng)時間、反應(yīng)溫度等，具有自動進(jìn)樣、自動檢測、自動清洗、循環(huán)重復(fù)分析等功能，結(jié)合免疫分析的特異性，實現(xiàn)對大量樣品的高通量連續(xù)分析。

5、免疫聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)：免疫聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù)是將免疫反應(yīng)和聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)(polymerase chain reaction，PCR)結(jié)合起來的一種免疫分析方法。將DNA分子和抗體通過一定的連接分子連接起來，DNA作為標(biāo)記物結(jié)合在抗體上，然后進(jìn)行免疫反應(yīng)，形成抗原一抗體一DNA復(fù)合物。將該復(fù)合物純化后，進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，使抗原一抗體一DNA復(fù)合物大量擴(kuò)增，可放大檢測信號，提高檢測靈敏度。

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