2、蒸餾法的操作步驟和注意事項(xiàng)

(1)蒸餾裝置的組成

減壓蒸餾裝置主要由3部分組成，包括蒸餾部分、抽氣部分以及在它們之間的保護(hù)和測(cè)壓裝置。

①蒸餾部分：蒸餾部分由蒸餾瓶、冷凝器和接收瓶組成。蒸餾瓶采用兩個(gè)頸的克氏蒸餾瓶，一個(gè)頸插溫度計(jì)，另一個(gè)頸插一根毛細(xì)管，起到防止暴沸作用。冷凝器采用普通冷凝管，接收瓶為普通接收瓶。

②抽氣部分及保護(hù)和測(cè)壓裝置：這兩部分主要由真空泵、真空膠管、保護(hù)裝置和測(cè)壓裝置組成。在保護(hù)系統(tǒng)中，要有安全瓶，主要用于調(diào)節(jié)系統(tǒng)壓力及放氣。封閉式壓力計(jì)用于測(cè)量系統(tǒng)中的實(shí)際壓力。設(shè)3個(gè)吸收塔，第一個(gè)裝無水氯化鈣或硅膠，用于吸水；第二個(gè)裝粒狀氫氧化鈉，用于吸酸；第三個(gè)裝石蠟片，可吸收烴類氣體。普通旋片式真空泵達(dá)不到工作壓力時(shí)，還應(yīng)串聯(lián)真空擴(kuò)散泵。

減壓蒸餾時(shí)，必須保證系統(tǒng)不漏氣，各接口要涂好真空脂，不可用普通膠管代替真空膠管。

(2)蒸餾具體操作步驟

①加料：液體量不要超過克氏蒸餾瓶容積的一半，可防止暴沸或液體的飛沫被蒸氣帶走?？耸险麴s瓶要有2/3浸入到浴液中。

②減壓檢漏，調(diào)壓：調(diào)整到需要的壓力，如敵敵畏為0.1Pa。減壓蒸餾，采用磁力加熱攪拌器是一種非常簡(jiǎn)便、高效的方法。

③加熱：100°C以下樣品采用水浴，100～250°C油浴(甘油等)，250°C以上砂浴，超過250℃時(shí)不能采用玻璃蒸餾器。

④沸騰：此時(shí)，溫度計(jì)指示急劇上升。

⑤蒸餾：開始蒸餾時(shí)既不要快也不能太慢，控制速度為每秒1～2滴。接前餾分，注意觀察壓力和溫度的變化。當(dāng)達(dá)到所需餾分沸點(diǎn)時(shí)，更換接收瓶；當(dāng)溫度超過所需餾分沸點(diǎn)時(shí)，停止蒸餾。減壓蒸餾法對(duì)在常壓下蒸餾易分解或遇熱易分解的樣品非常有效。一般要進(jìn)行2～3次重蒸餾，才能達(dá)到要求。

(3)蒸餾注意事項(xiàng)

溫度計(jì)水銀球的上限與克氏蒸餾瓶支管下限在一水平面上，先攪拌、減壓，后升溫。

減壓蒸餾法適用的農(nóng)藥品種有：2，4-滴丁酯、敵敵畏、稻瘟凈、禾草丹等。

(三)柱層析法

柱層析法的特點(diǎn)是應(yīng)用范圍廣，固體、液體都適宜，操作簡(jiǎn)便，分離效率高。

1、柱層析的基本原理

根據(jù)組分在固定相中的作用原理不同，柱層析可分為吸附層析、分配層析、離子交換層析和排阻層析。農(nóng)藥純化常用吸附層析和分配層析。

(1)吸附層析：吸附層析根據(jù)固定相(吸附劑)對(duì)混合物中各組分的吸附能力不同實(shí)現(xiàn)分離和純化。例如用硅膠作固定相，當(dāng)混合物的溶液流經(jīng)固定相時(shí)，混合物中各組分就被吸附在硅膠顆粒表面上：再用單一溶劑或混合溶劑作流動(dòng)相淋洗該柱，由于硅膠對(duì)混合物中各組分的吸附能力不同，已被吸附在硅膠上的各組分就會(huì)以不同的速度解吸并重新回到溶劑中。隨著溶劑的向前移動(dòng)，已解吸的各組分遇到新的吸附劑就又再一次以不等的吸附力被吸附，當(dāng)新的流動(dòng)相流過時(shí)，它們就又一次解吸進(jìn)入流動(dòng)相并向前移動(dòng)。如此在層析柱上不斷地發(fā)生吸附、解吸、再吸附、再解吸，使混合物中各組分在吸附劑表面上表現(xiàn)出的吸附能力的微小差異，經(jīng)多次重復(fù)積累而成為大的差異。結(jié)果吸附力小的組分先從層析柱中流出，吸附力大的組分后從柱中流出，從而達(dá)到分離的目的。

(2)分配層析：分配層析與吸附層析的不同之處是混合物中各組分的分離是根據(jù)其在兩相中的分配系數(shù)的差異來實(shí)現(xiàn)的。吸附層析實(shí)質(zhì)屬于液固色譜范疇，而分配層析屬于液液色譜范疇。

2、柱層析的基本操作步驟

(1)選擇層析柱：層析柱的長(zhǎng)度和口徑之比以10：1為宜，堿式滴定管可當(dāng)層析柱來使用。

(2)選擇吸附劑：吸附劑的要求為：①不溶于選用的淋洗液；②不與淋洗液和分離組分起化學(xué)反應(yīng)，也不起催化作用；③無色，粒度均勻，細(xì)度合適。常用吸附劑有硅膠、氧化鋁、弗羅里硅土等。

一般分離極性強(qiáng)的物質(zhì)，選用吸附力小的吸附劑；分離極性弱的物質(zhì)，應(yīng)選用吸附力強(qiáng)的吸附劑。

(3)填裝吸附劑：填裝吸附劑時(shí)，要求均勻緊密一致。填裝有干法和濕法兩種，干法不容易填裝均勻，濕法容易裝好層析柱。濕法是稱取適量的吸附劑，一般為分離樣品質(zhì)量的50倍，加入溶劑調(diào)和，調(diào)好后倒人柱中，使其自然緩慢沉降。

(4)選擇淋洗劑：可采用薄層色譜的方法選出理想的淋洗液。選擇原則：分離極性強(qiáng)的農(nóng)藥，選用吸附能力較弱的吸附劑和極性較強(qiáng)的溶劑作淋洗液；分離極性弱的農(nóng)藥，宜選用吸附能力較強(qiáng)的吸附劑和極性較弱的溶劑作淋洗液；在單一溶劑作為淋洗液不理想時(shí)，可加入一些極性更強(qiáng)或更弱的溶劑來調(diào)節(jié)淋洗液的極性，以達(dá)到最佳分離效果。

(5)洗柱：添加淋洗液，除去層析柱中的殘留空氣，使柱更緊密均勻，保持柱頂不干。

(6)加樣：待洗柱時(shí)的淋洗液離柱填料平面1mm左右，加入待分離的組分。滴加淋洗液，流速為每秒l滴，或每4s1滴。在操作過程中，防止柱頂端進(jìn)人空氣，不要讓柱填料裸露在空氣中。

(7)洗脫：根據(jù)分離情況，切割收集各組分，進(jìn)行鑒定，找到純度高的餾分，然后蒸餾干燥得到農(nóng)藥純品。

柱層析適用于殺草丹、丁草胺、2，4-滴丁酯等農(nóng)藥品種的純化。

(四)區(qū)熔提純法(區(qū)域熔融法)

區(qū)熔提純法是根據(jù)被提純農(nóng)藥中各組分在相變中重分布的原理來得到較純組分的提純方法。雜質(zhì)一般使純物質(zhì)的熔點(diǎn)降低，隨著熔區(qū)的移動(dòng)，能使雜質(zhì)一起移動(dòng)，而富集于一端，純物質(zhì)則向相反的方向移動(dòng)而富集于另一端。該方法設(shè)備簡(jiǎn)單，提純效率高，操作可自動(dòng)化，應(yīng)用范圍廣。一般操作先臥式提純6次，再立式提純1次。本方法適用于六六六4種異構(gòu)體等農(nóng)藥的提純。

(五)升華法

所謂升華就是指物質(zhì)不經(jīng)過液態(tài)而直接從固態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)闅鈶B(tài)的現(xiàn)象，這樣的農(nóng)藥必須具有相當(dāng)高的蒸氣壓。升華法有常壓和減壓兩種方法。可以升華的農(nóng)藥品種有：硫黃、六六六、氯化乙基汞、磷化鋁等。升華法在農(nóng)藥純品制備中應(yīng)用較少。

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