隨著畜禽養(yǎng)殖業(yè)呈集約化、規(guī)?；⑸虡I(yè)化、高密度發(fā)展，畜禽病害呈現(xiàn)高頻化、復(fù)雜化趨勢，為降低發(fā)病與死亡帶來的經(jīng)濟損失，獸藥被廣泛用于預(yù)防和治療畜禽疾病，或以亞治療劑量添加于飼料中以促進動物生長、改善動物產(chǎn)品品質(zhì)和提高飼料利用率。但部分畜禽養(yǎng)殖場人員缺乏對藥物危害的認知及科學用藥的指導(dǎo)，或受經(jīng)濟利益驅(qū)使，不合理用藥，甚至非法濫用各類獸藥，且不嚴格遵守休藥期，導(dǎo)致畜禽產(chǎn)品中獸藥殘留超標現(xiàn)象時有發(fā)生。無論獸藥殘留水平高低，通過長期的食物鏈蓄集到一定量后會對人體產(chǎn)生毒副作用，如過敏反應(yīng)，泌尿系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)、心肌損害等，某些藥物還具有潛在的致畸性、致癌性，或致休克甚至死亡。此外，病原菌在長期接觸這些低濃度藥物后，容易增加病毒的耐藥性及變異的可能性，從而減弱人類疾病的治療效果，使公共衛(wèi)生面臨嚴峻的挑戰(zhàn)和威脅。獸藥殘留還會使畜禽產(chǎn)品出口受阻，影響畜禽業(yè)的健康持續(xù)發(fā)展和國家的經(jīng)濟發(fā)展。因此，開展獸藥殘留的檢測研究，規(guī)范用藥，以指導(dǎo)生產(chǎn)，保障食品安全，提高人民健康水平，增強畜禽產(chǎn)品的市場競爭力。

目前，獸藥殘留的檢測方法有酶聯(lián)免疫法、生物法、電化學法、氣相色譜法、高效液相色譜法及高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(HPLC-MS/MS)等。其中，生物法和酶聯(lián)免疫法的檢測結(jié)果容易出現(xiàn)假陽性；高效液相色譜法和氣相色譜法的靈敏度低、選擇性差，且多集中于單一種類獸藥的分析，完成一個樣品中多類藥物測定需采用不同的方法，前處理過程耗時、繁瑣，檢測低效高價；超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法具有高通量、高選擇性、高分離度、高靈敏度、高檢測效率等優(yōu)勢，是獸藥多殘留檢測的首選方法。雞蛋、雞肉樣品基質(zhì)復(fù)雜且獸藥大多為微量甚至痕量殘留，而國家要求的殘留限量較低，給檢測工作帶來巨大挑戰(zhàn)。雖然獸藥多殘留檢測已有較多文獻報道，但未見同時測定雞蛋和雞肉中磺胺類、喹諾酮類、氯霉素類、金剛烷胺類獸藥殘留的報道。

本研究擬建立超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時測定雞蛋和雞肉中磺胺類、喹諾酮類、氯霉素類和金剛烷胺類獸藥殘留，希望為禽類產(chǎn)品中獸藥殘留的檢測提供有效手段。

1實驗部分

1.1儀器與裝置

1290超高效液相色譜儀、ZORBAXC18色譜柱(50mm×2.1mm×1.8μm)：美國Agilent公司產(chǎn)品；QTRAP5500三重四極桿/線性離子阱質(zhì)譜儀：美國ABSciex公司產(chǎn)品；渦旋振蕩器：美國ThermoScientific公司產(chǎn)品；JD200-2電子天平：沈陽龍騰電子有限公司產(chǎn)品；TGL-15B型高速臺式離心機：上海安亭科學儀器廠產(chǎn)品；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：德國海道爾夫公司產(chǎn)品。

1.2樣品與試劑

磺胺二甲異噁唑、磺胺嘧啶、磺胺甲基異噁唑、磺胺噻唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺鄰二甲氧嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺喹噁林、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺間二甲氧嘧啶、磺胺氯噠嗪、磺胺甲噻二唑、恩諾沙星、諾氟沙星、環(huán)丙沙星、達氟沙星、氟羅沙星、培氟沙星、洛美沙星、氧氟沙星、金剛烷胺、金剛乙胺、金剛烷胺-D15(10mg/L)，恩諾沙星-D5、諾氟沙星-D5、環(huán)丙沙星-D8、磺胺鄰二甲氧嘧啶-D3、磺胺間二甲氧嘧啶-D6、氯霉素-D5溶液標準物質(zhì)(5mg/L)，氯霉素、甲砜霉素、氟甲砜霉素溶液標準物質(zhì)(100mg/L)：均購于農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量標準研究中心；甲醇、乙腈：色譜純，德國Merck公司產(chǎn)品；甲酸：色譜純，美國Sigma公司產(chǎn)品；無水硫酸鈉、乙酸銨、氯化鈉、正己烷、環(huán)己烷、鹽酸(優(yōu)級純)、氨水(分析純，含量25%～28%)、磷酸氫二鉀(分析純)：上海國藥集團產(chǎn)品；PSA、C18填料(50μm)：中國迪馬科技公司產(chǎn)品；二甲亞砜：分析純，天津風船化學試劑科技有限公司產(chǎn)品；實驗用水：自制超純水。

1.3溶液配制

用甲醇稀釋各獸藥溶液標準物質(zhì)：金剛烷胺、金剛乙胺、氯霉素配制成0.1mg/L，喹諾酮類、磺胺類、甲砜霉素、氟甲砜霉素配制成1.0mg/L，7種內(nèi)標均配制為0.5mg/L貯備液，于4℃下避光保存。系列標準溶液用甲醇配制，現(xiàn)用現(xiàn)配。

0.2mol/L鹽酸溶液的配制：取1.5mL鹽酸(36%～38%)，用超純水定容至100mL。

1.4樣品前處理

1.4.1樣品提取

稱取5.00g(精確至0.01g)均質(zhì)試樣于50mL塑料離心管中，加入30μL0.5mg/L內(nèi)標溶液、5.0mL鹽酸溶液，渦旋至樣品分散后，加15.0mL乙腈和7～9g氯化鈉至溶液呈過飽和狀態(tài)，渦旋提取5～7min，以5000r/min離心5min，取出乙腈層至50mL離心管中，向殘渣中加15.0mL乙腈重復(fù)提取1次，合并2次提取液，待凈化。

1.4.2樣品凈化

向上述待凈化提取液中加入8～10mL正己烷-環(huán)己烷混合溶液(1∶1，V/V)，渦旋1min，以5000r/min離心5min，取乙腈層濃縮至干，加入2.0mL0.2%甲酸-乙酸乙酯溶液溶解殘留物，過0.22μm濾膜后再將濾液蒸干，加入1.0mL0.2%甲酸-甲醇溶液復(fù)溶，待凈化。

將30mgC18和60mgPSA吸附材料混勻，加入下端墊有濾紙的2.0mL塑料醫(yī)用注射器中，再加入2.0mL0.2%甲酸-甲醇溶液淋洗，除去淋洗液，將上述1.0mL待凈化溶液轉(zhuǎn)移至凈化柱，使其在重力作用下流出，接收凈化液，過0.22μm濾膜，待UHPLC-MS/MS測定。

1.5實驗條件

1.5.1色譜條件

流動相：A為0.1%甲酸-水溶液(含0.1mmol/L乙酸銨)，B為0.2%甲酸-甲醇溶液；流速0.2mL/min；柱溫35℃；進樣量2.0μL；梯度洗脫程序：0.00～3.00min(10%～40%B)，3.00～6.00min(40%～95%B)，6.00～8.00min(95%B)，8.00～8.20min(95%～10%B)，8.20～10.00min(10%B)。

1.5.2質(zhì)譜條件

ESI離子源；離子源溫度550℃；噴霧氣(GS1)壓力0.379MPa；輔助加熱氣(GS2)壓力0.379MPa；氣簾氣壓力0.241MPa；正、負離子模式同時掃描，其中氯霉素類藥物為負離子模式掃描，噴霧電壓-4500V，多反應(yīng)監(jiān)測模式(MRM)；磺胺類、喹諾酮類、金剛烷胺類為正離子模式掃描，噴霧電壓5500V，多反應(yīng)監(jiān)測模式，其他質(zhì)譜參數(shù)列于表1。

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