2.4.2共有峰的確定

根據(jù)10批便可通片的指紋圖譜檢測結(jié)果，共標(biāo)出16個(gè)共有峰，樣品峰經(jīng)與對照品比較分析，指認(rèn)出5個(gè)共有成分，其中2號峰為松果菊苷，4號峰為柚皮苷，5號峰為新橙皮苷，9號峰為蘆薈苷，15號峰為蘆薈大黃素，見圖2。9號峰分離度較好，峰面積也比較穩(wěn)定，故選擇此峰作為參照峰。

2.4.3指紋圖譜相似度評價(jià)

將10批樣品指紋圖譜與對照指紋圖譜分別導(dǎo)入“中藥色譜指紋圖譜相似度評價(jià)系統(tǒng)”（2004A版）軟件進(jìn)行相似度評價(jià)。結(jié)果10批便可通片相似度在0.971～0.999之間，表明相似度良好，結(jié)果見表3。

2.4.4共有峰的來源確認(rèn)

分別取便可通組方中的各單味藥材適量，精密稱定，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備藥材樣品溶液。分別精密吸取供試品溶液和各單味藥材樣品溶液各10μL進(jìn)樣，注入高效液相色譜儀，記錄100min色譜圖。對保留時(shí)間保持一致的色譜峰進(jìn)行分析比較，根據(jù)紫外光譜信息，對全方與藥材指紋圖譜的相關(guān)峰進(jìn)行指認(rèn)，確認(rèn)共有峰的藥材歸屬，見圖3。

確認(rèn)了便可通片HPLC指紋圖譜中16個(gè)特征峰的來源，其中2、3號峰來自肉蓯蓉，3號峰來自生地黃，3號峰來自玄參，4、5、7號峰來自枳實(shí)，1、6、8、9、10、11、12、13、14、15、16號峰來自蘆薈，16號峰來自當(dāng)歸，16號峰來自決明子?；鹇槿省⑻胰食煞侄酁槟┒宋?，在該色譜條件下基本無響應(yīng)，故在樣品中未進(jìn)行共有峰標(biāo)記。

2.5指標(biāo)成分的含量測定

2.5.1線性關(guān)系考察

精密吸取“2.2.1”項(xiàng)下制備的對照品溶液適量，分別加入流動(dòng)相（或甲醇）稀釋成系列質(zhì)量濃度的對照品溶液進(jìn)行測定，進(jìn)樣10μL,測定其峰面積，以質(zhì)量濃度（X）為橫坐標(biāo)，峰面積（Y）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程。結(jié)果見表4。

2.5.2加樣回收率試驗(yàn)

精密稱量已知蘆薈苷、柚皮苷、新橙皮苷、松果菊苷含量的樣品（S1)0.5g，共6份；分別精密加入蘆薈苷對照品8.1mg，柚皮苷對照品7.9mg，新橙皮苷對照品8.6mg，松果菊苷對照品溶液（0.5196mg·mL^-1)3.5mL，即1.8mg；置50mL棕色量瓶中，按照“2.2.2”項(xiàng)下操作，即得。按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行分析，結(jié)果蘆薈苷、柚皮苷、新橙皮苷、松果菊苷的平均加樣回收率分別為101.62%、99.52%、102.05%和98.35%，RSD分別為2.01%、1.95%、2.21%和2.84%，表明本方法對各成分的加樣回收率符合要求。

2.5.3樣品含量測定

取10批便可通片樣品適量，精密稱定，按“2.2.2”項(xiàng)下制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行分析。結(jié)果見表5。

3討論

本研究考察了便可通片不同提取方式（超聲提取、加熱回流提?。?，不同提取溶劑（乙醇、水、甲醇、50%甲醇）的提取效果，結(jié)果表明以甲醇超聲提取效果最佳。

本研究采用DAD檢測器全波長掃描的方式，參考處方各單味藥材有效成分的檢測波長，提取出200、220、235、260、280、300nm等波長下的圖譜進(jìn)行比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在300nm下，樣品色譜圖呈現(xiàn)的色譜峰數(shù)目多，且響應(yīng)值較高。同時(shí)考察了甲醇-水、乙腈-水、甲醇-0.1%冰醋酸水、甲醇-0.2%冰醋酸水4種流動(dòng)相系統(tǒng)，發(fā)現(xiàn)采用甲醇-0.1%冰醋酸水流動(dòng)相系統(tǒng)，參照峰（蘆薈苷）峰型較好，分離度、對稱因子和理論塔板數(shù)均較好。

本研究對便可通片全方與藥材指紋圖譜的相關(guān)峰進(jìn)行指認(rèn)，確認(rèn)了5個(gè)峰的物質(zhì)成分，主要來自肉蓯蓉、枳實(shí)、蘆薈。肉蓯蓉中發(fā)揮改善腸胃功能的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)為苯乙醇苷類化合物，其中松果菊苷能緩解便溏和便血，促進(jìn)受損腸道肌層表皮細(xì)胞的增殖和減少炎性浸潤。枳實(shí)中柚皮苷、新橙皮苷等黃酮類成分，可改善功能性消化不良大鼠的胃排空和小腸推進(jìn)；蘆薈含有蘆薈苷等蒽醌成分，具有瀉下通便的功效，故本研究選擇松果菊苷、柚皮苷、新橙皮苷、蘆薈苷4種成分進(jìn)行定量測定。含量測定結(jié)果表明，便可通片10批樣品中松果菊苷、蘆薈苷含量變化較大。本研究發(fā)現(xiàn)，蘆薈苷對照品（甲醇溶解）放置較長時(shí)間后會(huì)降解成2個(gè)峰，分別對應(yīng)樣品中8、9號峰。亦有文獻(xiàn)報(bào)道蘆薈苷大部分是蘆薈苷A和蘆薈苷B兩個(gè)光學(xué)異構(gòu)體的混合體，其對照品峰面積的改變直接影響樣品中蘆薈苷含量的計(jì)算。故本實(shí)驗(yàn)對蘆薈苷對照品的配置進(jìn)行研究，分別用甲醇、流動(dòng)相溶解，考察0、2、4、6h蘆薈苷降解率。結(jié)果表明，蘆薈苷在流動(dòng)相混合溶液中較甲醇溶液中更為穩(wěn)定。因此，選擇蘆薈苷作為質(zhì)控指標(biāo)尤為重要。

本研究建立了10批便可通片的指紋圖譜，采用指紋圖譜軟件共標(biāo)定出16個(gè)共有峰，相似度均大于0.95，說明所建立的指紋圖譜具有較好的可控性，可為便可通片的質(zhì)量評價(jià)提供依據(jù)。方法學(xué)試驗(yàn)表明該色譜方法可同時(shí)定量分析蘆薈苷、柚皮苷、新橙皮苷、松果菊苷的含量。采用上述建立的HPLC指紋圖譜方法，可同時(shí)對便可通片藥材、飲片與成品進(jìn)行指紋圖譜檢測和有效成分含量測定，實(shí)現(xiàn)終端質(zhì)控向生產(chǎn)過程質(zhì)量控制過渡，以提升產(chǎn)品質(zhì)量，穩(wěn)定產(chǎn)品品質(zhì)，為便可通片的上市生產(chǎn)奠定了基礎(chǔ)。

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