2、菌株MCDA02的鑒定菌株MCDA02為革蘭氏陰性短桿菌(圖2b)，無芽孢。該菌株在LB固體培養(yǎng)上培養(yǎng)48h后：黃色，不透明，表面光滑濕潤(rùn)，圓形，邊緣齊整，中心稍突起，易挑取(圖2a)。該菌株明膠酶、吲哚試驗(yàn)、硫化氫產(chǎn)生、VP試驗(yàn)、硝酸鹽還原試驗(yàn)、尿素酶、檸檬酸鹽均呈陰性，氧化酶、接觸酶試驗(yàn)均為陽性(表1)。菌株MCDA0216SrDNA序列提交GenBank(登錄號(hào)：MH454348)，BLAST比對(duì)后發(fā)現(xiàn)菌株MCDA02與Microbacteriumesteraromaticum的同源性最高。利用MEGA9.0軟件通過鄰接法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(圖3)，菌株MCDA02與Microbacteriumesteraromaticum親緣關(guān)系最近，將菌株MCDA02鑒定為Microbacteriumesteraromaticum。目前尚未見酯香微桿菌產(chǎn)幾丁質(zhì)脫乙酰酶的報(bào)道。

3、發(fā)酵培養(yǎng)基成分對(duì)菌株MCDA02發(fā)酵產(chǎn)CDA的影響

（1）發(fā)酵培養(yǎng)基碳源對(duì)菌株MCDA02產(chǎn)酶的影響

碳源對(duì)菌株MCDA02發(fā)酵產(chǎn)酶的影響如圖4，所選的8種不同的碳源中，木薯淀粉為碳源時(shí)該菌株產(chǎn)酶最高，其次為乳糖，其相對(duì)酶活也達(dá)到了70％以上，玉米淀粉相對(duì)酶活最低僅有10％。因此最終選用木薯淀粉作為發(fā)酵培養(yǎng)基的碳源。

（2）發(fā)酵培養(yǎng)基氮源對(duì)菌株MCDA02發(fā)酵產(chǎn)CDA的影響

氮源對(duì)菌株MCDA02生長(zhǎng)的影響如圖5，所選的11種不同的氮源中，添加蛋白胨時(shí)該菌株產(chǎn)酶最高，其次為玉米漿，其相對(duì)酶活也達(dá)到75％以上，而其余氮源相對(duì)酶活均為達(dá)到70％。因此最終選用蛋白胨作為發(fā)酵培養(yǎng)基的氮源。

（3）發(fā)酵培養(yǎng)基無機(jī)鹽對(duì)菌株MCDA02發(fā)酵產(chǎn)CDA的影響

無機(jī)鹽對(duì)菌株MCDA02生長(zhǎng)的影響如圖6，所選的9種不同的無機(jī)鹽中，添加ZnSO4時(shí)該菌株產(chǎn)酶最高，緊接著是KH2PO4，其相對(duì)酶活達(dá)75％以上，添加CuSO4時(shí)相對(duì)酶活最低，不足25％。因此最終選用ZnSO4為配制發(fā)酵培養(yǎng)基所用無機(jī)鹽。

4、發(fā)酵條件對(duì)菌株MCDA02發(fā)酵產(chǎn)CDA的影響

（1）發(fā)酵時(shí)間對(duì)菌株MCDA02發(fā)酵產(chǎn)CDA的影響

發(fā)酵時(shí)間對(duì)菌株MCDA02生長(zhǎng)的影響如圖7，發(fā)酵時(shí)間在36h～48h時(shí)，產(chǎn)酶量顯著增加。發(fā)酵時(shí)間處于48h～72h之間時(shí)，產(chǎn)酶量增長(zhǎng)速度減緩。發(fā)酵時(shí)間達(dá)到72h時(shí)產(chǎn)酶量達(dá)到最高點(diǎn)，發(fā)酵72h后菌株MCDA02產(chǎn)酶量開始下降。

（2）發(fā)酵溫度對(duì)菌株MCDA02發(fā)酵產(chǎn)CDA的影響

發(fā)酵溫度對(duì)菌株MCDA02生長(zhǎng)的影響如圖8，在30℃時(shí)菌株MCDA02產(chǎn)幾丁質(zhì)脫乙酰酶的量最高。溫度超過30℃時(shí)，菌株的產(chǎn)酶量迅速下降，溫度到達(dá)40℃時(shí)，菌株MCDA02的相對(duì)酶活低至10％左右。

（3）發(fā)酵培養(yǎng)基起始pH對(duì)菌株MCDA02發(fā)酵產(chǎn)CDA的影響

發(fā)酵培養(yǎng)基起始pH對(duì)菌株MCDA02生長(zhǎng)的影響如圖9，隨著發(fā)酵培養(yǎng)基初始pH的升高，菌株產(chǎn)酶能力隨之提升，pH為8.0時(shí)，產(chǎn)酶量達(dá)到最高。pH繼續(xù)升高，菌株MCDA02產(chǎn)酶量降低，pH為10.0時(shí)，菌株MCDA02相對(duì)酶活低至20％以下。
 

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