(五)活性炭-Oelite柱色譜凈化

在具抽真空側口的色譜柱尾頂端塞上單孔5號橡皮塞，接上500mL圓底燒瓶，打開色譜柱活塞，連接抽真空裝置。

在色譜柱中先后加入0.5g硅烷化Celite和5g活性炭Celite混合物，并使之填塞緊密。在吸附劑上面塞入1～2cm玻璃棉，用50mL25%甲苯-乙腈淋洗液預洗，當預洗液接近玻璃棉頂端0.5cm處時關閉柱活塞，斷開真空裝置，棄去圓底燒瓶中的溶液，重新將其接上色譜柱。將已制備好的10mL二氯甲烷提取液上柱，以5mL/min的速度淋洗。分別用10mL二氯甲烷和25mL淋洗液洗1L圓底燒瓶，并將洗出液分別上柱淋洗，當淋洗液接近玻璃棉頂端時加入下一溶液。

加人100mL淋洗液，并以5mL/min的速度淋洗。當淋洗液接近玻璃棉頂端時關閉柱塞。用真空旋轉蒸發(fā)器將500mL圓底燒瓶中的淋出液濃縮至干，并立即取下圓底燒瓶。在500mL圓底燒瓶中立即加入5mL甲醇，以溶解提取凈化后的殘留農(nóng)藥。對于高含水量樣品，需用每毫升溶液含有相當于20g樣品的提取液上色譜柱凈化；對于低含水量樣品，需用每毫升相當于10g樣品的提取液上柱凈化

1、硅烷化助濾劑：Celite 545的制備用鹽酸-水(1∶1)在2L燒杯中將150g助濾劑Celite 545(以下簡稱Celite)調成漿狀，蓋上玻璃蓋，沸點下磁力攪拌子攪拌10min。冷卻，過濾，用蒸話水洗至中性。先后用500mL甲醇和二氯甲烷洗Celite，并將其在通風櫥中自然晾干。將Celite轉移至1L具塞錐形瓶中，在120℃烘箱中加熱干燥過夜(打開瓶塞)后，置于干燥器冷卻。

將錐形瓶置于通風櫥，準確吸取3mL二氯二甲基硅烷加入錐形瓶中，使之與Celite充分混合，室溫下保存4h。在錐形瓶中加入500mL甲醇，搖勻，靜置15min。過濾硅烷化Celite，用異丙醇洗至中性。在通風櫥中將硅烷化Celite自然晾干，除去異丙醇。在105℃烘箱中將硅烷化Celite干燥2h，并在干燥器中冷卻。將其保存于具塞容器中。

通過2個試驗測定CeIite的硅烷化效果。一種方法是取大約1g Celite置于50mL水中，硅烷化Celite會漂?。涣硪环N方法是取1g Celite置于20mL用甲基紅飽和的甲苯中，硅烷化Celite會呈黃色。在上述兩種方法中，如果Celite顆粒在水中下沉并且(或)在甲基紅飽和的甲苯中呈粉紅色，則Celite中仍存在活性部位，需要重新進行硅烷化處理。

2、活性炭的純化：用700mL鹽酸將100g活性炭Nuchar S1N調成漿狀，蓋上玻璃蓋，沸點下磁力攪拌子攪拌1h。

加700mL水，沸點下再攪拌30min。冷卻，過濾，用水洗至中性。先用500mL甲醇然后用500mL二氯甲烷洗活性炭，在通風櫥中自然晾干。在120℃烘箱中干燥4h后，置于干燥器中冷卻，并將其保存于具塞容器中。

3、活性炭-Celite柱的活性測定：按上述方法制備活性炭-Celite(1∶4，m/m)凈化柱；制備濃度為5μg／mL的不同氨基甲酸酯殺蟲劑(西維因、滅蟲威、滅蟲威亞砜、滅多威)的甲醇溶液。滅蟲威亞砜在溶液中易分解，混合標樣應在使用前現(xiàn)配現(xiàn)用。分別吸取5mL上述溶液加入250mL圓底燒瓶和25mL容量瓶中，用甲醇將溶液定容至25mL，作為高效液相色譜(HPLc)分析的標樣。

按上述方法用真空旋轉蒸發(fā)器將圓底燒瓶中的標準樣品溶液蒸發(fā)至干。當最后痕量的甲醇被蒸發(fā)完全后，將圓底燒瓶從蒸發(fā)器上取下，用10mL二氯甲烷將氨基甲酸酯殘留物溶解。將圓底燒瓶中的二氯甲烷溶液過已制備好的吸附柱，并按上述方法淋洗。

將淋出液濃縮至干，用甲醇溶解，定容至25mL。按測定方法測定氨基甲酸酯的量，并計算其回收率。如果回收率≥95％，則活性炭是達到要求的。

(六)測定

采用高效液相色譜儀測定，柱后衍生化，熒光檢測。

1、 原理

甲醇溶液中的農(nóng)藥殘留以乙腈-水為流動相，通過C₈反相高效液相色譜柱，進行梯度洗脫分離。柱后淋出液中的農(nóng)藥殘留在堿性條件下被在線水解為甲胺化合物，該化合物與鄰苯二醛和2-巰基乙醇在線反應，生成熒光基團，通過熒光檢測器檢測。這一柱后衍生化熒光檢測的測定方法對于含有氨基甲酸酯結構的農(nóng)藥殘留具有很好的選擇性。

2、儀器

(1)溶劑過濾裝置：具Luer-Lip頭的10mL注射器，配有直徑為13mm的Swinny不銹鋼過濾頭和直徑為13mm的5．0μm LS型過濾器，也可配備直徑為13mm用聚丙烯固定的0．22μm尼龍濾膜。也可選擇使用預裝好的無需注射器的裝置。高效液相色譜儀包括下列組件(圖7-2)：流動相傳輸系統(tǒng)、程序控制的高效液相色譜梯度洗脫系統(tǒng)、進樣器(具有10μL進樣環(huán)的自動取樣器)、不銹鋼保護柱(內(nèi)含25～37μm的C₈或C₁₈濾芯)、柱溫箱或柱加熱器、分析柱 [25cm×4.6mm(內(nèi)徑)，填充6μm Zorbax C₈球形顆粒，柱填充物包括5μm或6μm由辛硅烷試劑鍵合形成的單分子球形結合物]。連接管[編號為304的不銹鋼管(外徑為1.6mm，內(nèi)徑為O.18mm)]連接進樣器、色譜柱與第一個T形管。

(2)柱后衍生單元：該單元由下列組件構成：Tericon涂層的玻璃柱[60cm×25mm(內(nèi)徑)作為儲液器，柱內(nèi)存有氫氧化鈉和OPA-MER(二反應溶液；通氮氣增加柱壓，并通過調節(jié)壓力大小控制合適的溶液流速，可以用泵代替氮氣增壓]、Tefton限制管[6m×0.5mm(內(nèi)徑)，其將每個儲液器與15cm)4 0.18mm(內(nèi)徑)的不銹鋼管相連接，該不銹鋼管依次與內(nèi)徑為0.74mm的不銹鋼T形混合器(如ZVT-062)相連，與流動相相通]、氨基甲酸酯水解室[不銹鋼管、3m×0.48mm(內(nèi)徑)，編號為321，繞有與小型烘箱相連的加熱管以維持水解室的溫度始終保持在100⁰C、反應管[25cm不銹鋼管，一端與T形混合器相連以輸送OPA-MERC溶液，另一端連接檢測器內(nèi)腔，1.5cm×0.3mm(內(nèi)徑)]。

目前可以從一些廠家購買商品化的柱后衍生反應裝置，以代替上述組件。該反應裝置最好配備雙泵。

(3)熒光檢測器：熒光檢測器為雙單色器，配有≤20pL的腔體。

(4)記錄儀：記錄儀為帶狀制圖儀或者與檢測器連用的自動積分儀。

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